4T1-GFP

4T1-GFP to genetycznie zmodyfikowana odmiana mysiej linii komórkowej raka sutka 4T1, która w sposób konstytutywny wyraża zielone białko fluorescencyjne (GFP), co umożliwia wizualizację i śledzenie komórek nowotworowych w czasie rzeczywistym zarówno in vitro, jak i in vivo. Pierwotna linia 4T1 pochodziła z nowotworu sutka, który powstał spontanicznie u myszy rasy BALB/c i jest charakteryzowana jako wysoce nowotworotwórczy, potrójnie ujemny model raka piersi. Po ortotopowym wstrzyknięciu do poduszeczki tłuszczowej sutka syngenicznych myszy BALB/c z prawidłową odpornością komórki 4T1 tworzą agresywne guzy pierwotne, które spontanicznie dają przerzuty do płuc, wątroby, węzłów chłonnych i kości, co ściśle odzwierciedla przebieg ludzkiego raka piersi w stadium IV. Co istotne, wykazano, że model 4T1 powoduje powstawanie osteolitycznych przerzutów do kości po ortotopowym wszczepieniu, co czyni go modelem o znaczeniu klinicznym do badania rozprzestrzeniania się raka piersi i kolonizacji szkieletu.

Znaczniczenie komórek 4T1 białkiem GFP umożliwia czułe wykrywanie guzów pierwotnych, krążących komórek nowotworowych oraz ognisk przerzutowych za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej, cytometrii przepływowej oraz systemów obrazowania in vivo. Ułatwia to ilościową ocenę obciążenia przerzutowego, obrazowanie in vivo dynamiki komórek nowotworowych oraz śledzenie interakcji między komórkami nowotworowymi a komórkami zrębu lub komórkami odpornościowymi. W modelach ortotopowych i wewnątrzsercowych pochodne linii 4T1 wyrażające GFP pozwalają na precyzyjną identyfikację komórek nowotworowych w szpiku kostnym, miąższu płucnym i innych miejscach przerzutowych, pokonując ograniczenia związane z samym wykrywaniem histologicznym. Ponieważ macierzysta linia 4T1 zachowuje nienaruszone interakcje immunogeniczne u syngenicznych gospodarzy BALB/c, linia 4T1-GFP nadaje się szczególnie do badań dotyczących modulacji immunologicznej, przebudowy mikrośrodowiska nowotworowego oraz tworzenia nisz przerzutowych w warunkach pełnej kompetencji immunologicznej.

Pod względem molekularnym komórki 4T1 wykazują cechy agresywnego, mezenchymalnego raka piersi, w tym wysoką inwazyjność, odporność na anoikis oraz silną zdolność do tworzenia przerzutów. Doniesiono, że warianty i subklony linii 4T1 wykazują zróżnicowany tropizm przerzutowy oraz profile ekspresji chemokin, takie jak zwiększona produkcja CCL4 w pochodnych o tropizmie kostnym, co podkreśla przydatność tego modelu w analizie mechanizmów przerzutów specyficznych dla poszczególnych narządów. Jako fluorescencyjnie śledzalny odpowiednik tego uznanego systemu przerzutowego, linia 4T1-GFP stanowi potężną platformę do ilościowych badań nad przerzutami, testowania skuteczności terapeutycznej, badań z zakresu immunoonkologii oraz analizy kinetyki rozprzestrzeniania się i kolonizacji komórek nowotworowych in vivo.

Modyfikacja genetyczna: Stabilnie zmodyfikowany poprzez transdukcję lentiwirusową pozbawioną zdolności replikacji w celu ekspresji reporterowego białka fluorescencyjnego ZsGreen1; utrzymywany jako populacja poliklonalna pod selekcją puromycyną (1–5 µg/mL). Poziom bezpieczeństwa S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym