4T1-GFP

A 4T1-GFP é um derivado geneticamente modificado da linha celular murina 4T1 de carcinoma mamário que expressa de forma constitutiva a proteína fluorescente verde (GFP), permitindo a visualização e o rastreio em tempo real das células tumorais in vitro e in vivo. A linha parental 4T1 foi originalmente derivada de um tumor mamário de origem espontânea num rato BALB/c e caracteriza-se como um modelo de cancro da mama triplo-negativo altamente tumorigénico. Quando injetadas ortotopicamente na almofada adiposa mamária de ratos BALB/c singénicos imunocompetentes, as células 4T1 formam tumores primários agressivos que metastizam espontaneamente para o pulmão, fígado, gânglios linfáticos e ossos, reproduzindo fielmente a progressão do cancro da mama humano em estágio IV. Notavelmente, demonstrou-se que o modelo 4T1 produz metástases ósseas osteolíticas após a implantação ortotópica, tornando-o um modelo clinicamente relevante para o estudo da disseminação do cancro da mama e da colonização esquelética.

A marcação com GFP das células 4T1 permite a deteção sensível de tumores primários, células tumorais circulantes e focos metastáticos através de microscopia de fluorescência, citometria de fluxo e sistemas de imagiologia in vivo. Isto facilita a avaliação quantitativa da carga metastática, a imagiologia intravital da dinâmica das células tumorais e o acompanhamento das interações entre as células tumorais e o estroma ou entre as células tumorais e as células imunitárias. Em modelos ortotópicos e intracardíacos, os derivados de 4T1 que expressam GFP permitem a identificação precisa de células tumorais na medula óssea, no parênquima pulmonar e noutros locais metastáticos, superando as limitações da deteção histológica isolada. Uma vez que a linha parental 4T1 mantém intactas as interações imunogénicas em hospedeiros singénicos BALB/c, a 4T1-GFP é particularmente adequada para estudos que investiguem a modulação imunitária, a remodelação do microambiente tumoral e a formação de nichos metastáticos em condições de imunocompetência total.

Do ponto de vista molecular, as células 4T1 apresentam características de um carcinoma da mama agressivo e de tipo mesenquimal, incluindo elevada invasividade, resistência à anoikis e forte capacidade metastática. Foi relatado que variantes e subclones da 4T1 apresentam tropismo metastático diferencial e perfis de expressão de quimiocinas distintos, tais como a produção aumentada de CCL4 em derivados com tropismo ósseo, o que destaca a utilidade do modelo na análise dos mecanismos de metástase específicos de órgãos. Como contraparte rastreável por fluorescência deste sistema metastático estabelecido, o 4T1-GFP constitui uma plataforma poderosa para a investigação quantitativa da metástase, testes de eficácia terapêutica, estudos de imuno-oncologia e análise da disseminação de células tumorais e da cinética de colonização in vivo.

Modificação genética: Modificado de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, de modo a expressar o repórter da proteína fluorescente verde ZsGreen1; mantido como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Contenção S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia