4T1-GFP

La línea 4T1-GFP es un derivado genéticamente modificado de la línea celular murina 4T1 de carcinoma mamario que expresa de forma constitutiva la proteína fluorescente verde (GFP), lo que permite la visualización y el seguimiento en tiempo real de las células tumorales tanto in vitro como in vivo. La línea parental 4T1 se derivó originalmente de un tumor mamario de aparición espontánea en un ratón BALB/c y se caracteriza por ser un modelo de cáncer de mama triple negativo altamente tumorigénico. Cuando se inyectan ortotópicamente en el lecho adiposo mamario de ratones BALB/c singénicos inmunocompetentes, las células 4T1 forman tumores primarios agresivos que metastatizan espontáneamente al pulmón, el hígado, los ganglios linfáticos y los huesos, reproduciendo fielmente la progresión del cáncer de mama humano en estadio IV. Cabe destacar que se ha demostrado que el modelo 4T1 produce metástasis óseas osteolíticas tras la implantación ortotópica, lo que lo convierte en un modelo clínicamente relevante para estudiar la diseminación del cáncer de mama y la colonización esquelética.

El marcaje con GFP de las células 4T1 permite la detección sensible de tumores primarios, células tumorales circulantes y focos metastásicos mediante microscopía de fluorescencia, citometría de flujo y sistemas de imagen in vivo. Esto facilita la evaluación cuantitativa de la carga metastásica, la obtención de imágenes intravitales de la dinámica de las células tumorales y el seguimiento de las interacciones entre las células tumorales y el estroma o entre las células tumorales y las células inmunitarias. En modelos ortotópicos e intracardíacos, los derivados de 4T1 que expresan GFP permiten la identificación precisa de células tumorales en la médula ósea, el parénquima pulmonar y otros sitios metastásicos, superando las limitaciones de la detección histológica por sí sola. Dado que la línea parental 4T1 conserva intactas las interacciones inmunogénicas en huéspedes singénicos BALB/c, la línea 4T1-GFP resulta especialmente adecuada para estudios que investiguen la modulación inmunitaria, la remodelación del microambiente tumoral y la formación de nichos metastásicos en condiciones de plena inmunocompetencia.

Desde el punto de vista molecular, las células 4T1 presentan características de un carcinoma de mama agresivo de tipo mesenquimal, entre las que se incluyen una alta invasividad, resistencia al anoikis y una sólida capacidad metastásica. Se ha descrito que las variantes y subclones de 4T1 muestran tropismos metastásicos y perfiles de expresión de quimiocinas diferenciales, como una mayor producción de CCL4 en los derivados con tropismo óseo, lo que pone de relieve la utilidad del modelo para desentrañar los mecanismos de metástasis específicos de cada órgano. Como contrapartida trazable por fluorescencia de este sistema metastásico consolidado, 4T1-GFP proporciona una potente plataforma para la investigación cuantitativa de la metástasis, las pruebas de eficacia terapéutica, los estudios de inmuno-oncología y el análisis de la diseminación de las células tumorales y la cinética de colonización in vivo.

Modificación genética: Modificado de forma estable mediante transducción con un lentivirus incompetente para la replicación, a fin de expresar el reportero de proteína fluorescente verde ZsGreen1; se mantiene como una población policlonal bajo selección con puromicina (1-5 µg/mL). Contención S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía