4T1-GFP

4T1-GFP er et genetisk modificeret derivat af den murine 4T1-brystkarcinomcellelinje, der konstant udtrykker grønt fluorescerende protein (GFP), hvilket muliggør visualisering og sporing af tumorceller i realtid både in vitro og in vivo. Den oprindelige 4T1-linje stammer oprindeligt fra en spontant opstået brysttumor hos en BALB/c-mus og karakteriseres som en stærkt tumorigen, tredobbelt-negativ brystkræftmodel. Når 4T1-celler injiceres ortotopisk i brystfedtpuden hos syngene, immunkompetente BALB/c-mus, danner de aggressive primære tumorer, der spontant metastaserer til lunger, lever, lymfeknuder og knogler, hvilket nøje afspejler udviklingen af humant brystkræft i stadium IV. Det er især værd at bemærke, at 4T1-modellen har vist sig at danne osteolytiske knoglemetastaser efter ortotopisk implantation, hvilket gør den til en klinisk relevant model til undersøgelse af spredning af brystkræft og kolonisering af skelettet.

GFP-mærkningen af 4T1-celler muliggør følsom påvisning af primære tumorer, cirkulerende tumorceller og metastatiske foci ved hjælp af fluorescensmikroskopi, flowcytometri og in vivo-billeddannelsessystemer. Dette letter kvantitativ vurdering af metastatisk belastning, intravital billeddannelse af tumorcelledynamik samt sporing af interaktioner mellem tumor og stroma eller mellem tumor og immunceller. I ortotopiske og intrakardiale modeller muliggør GFP-udtrykkende 4T1-derivater præcis identifikation af tumorceller i knoglemarv, lungeparenkym og andre metastatiske steder, hvilket overvinder begrænsningerne ved udelukkende histologisk påvisning. Da den oprindelige 4T1-stamme bevarer intakte immunogene interaktioner i syngene BALB/c-værter, er 4T1-GFP særligt velegnet til undersøgelser af immunmodulering, omdannelse af tumorens mikromiljø og dannelse af metastatiske nicher under fuldt immunkompetente betingelser.

Molekylært udviser 4T1-celler træk ved aggressivt, mesenkymlignende brystkarcinom, herunder høj invasivitet, resistens over for anoikis og robust metastatisk evne. Det er rapporteret, at varianter og subkloner af 4T1 udviser differentieret metastatisk tropisme og kemokin-ekspressionsprofiler, såsom forøget CCL4-produktion i knogletrope derivater, hvilket understreger modellens anvendelighed i analysen af organspecifikke metastasemekanismer. Som en fluorescensmærket modstykke til dette etablerede metastasesystem udgør 4T1-GFP en kraftfuld platform til kvantitativ metastaseforskning, test af terapeutisk effektivitet, immuno-onkologiske studier samt analyse af tumorcellers spredning og koloniseringskinetik in vivo.

Genetisk modifikation: Stabilt modificeret ved replikationsinkompetent lentiviral transduktion til at udtrykke ZsGreen1-reporteren (grønt fluorescerende protein); opbevares som en polyklonal population under puromycin-selektion (1–5 µg/mL). S1/BSL-1-indeslutning.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring