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EO771
Tecido
Glândula mamária
Doença
Neoplasia maligna
Sinónimos
Eo771, E0771, EO 771

Documentos

EO771

Cell line · Número do produto 305352

A EO771 é uma linha celular de cancro mamário murino derivada de tumores espontâneos em ratos C57BL/6. Esta linha constitui um importante modelo pré-clínico para o estudo de...

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01Informações gerais

Descrição

A EO771 é uma linha celular de cancro mamário murino derivada de tumores espontâneos em ratinhos C57BL/6. Esta linha constitui um importante modelo pré-clínico para o estudo do cancro da mama num contexto imunocompetente, devido à sua compatibilidade com modelos de ratinhos C57BL/6 singénicos. Estes modelos facilitam a exploração das interações entre as células tumorais e o sistema imunitário, fornecendo informações sobre o crescimento tumoral e as metástases.

As células EO771 são classificadas como subtipo B luminal, caracterizado por ser recetor de estrogénio alfa (ERα) negativo, recetor de estrogénio beta (ERβ) positivo, recetor de progesterona positivo e ErbB2 (HER2) positivo. Esta classificação alinha-se com os tumores luminal B encontrados em humanos, que frequentemente têm prognósticos mais pobres em comparação com os tipos luminal A. O estatuto luminal B do EO771 torna-o relevante para a investigação das respostas à terapia hormonal; estudos demonstraram a sensibilidade da linha celular a tratamentos anti-estrogénicos, como o tamoxifeno e outros moduladores selectivos dos receptores de estrogénio.

Para além das suas caraterísticas fenotípicas, a EO771 revelou-se útil para estudos sobre metástases tumorais e modulação da resposta imunitária. O seu comportamento metastático reflecte o do cancro da mama humano, com disseminação frequente para os pulmões e outros locais, como o peritoneu e o cérebro. Estas caraterísticas fazem do EO771 um modelo valioso para avaliar a eficácia de novos tratamentos anticancerígenos e compreender a dinâmica do sistema imunitário tumoral.

Tecido
Glândula mamária
Doença
Neoplasia maligna
Sinónimos
  • Eo771
  • E0771
  • EO 771

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial

04Identificadores

Referência
EO771 (número de catálogo Cytion 305352)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_GR23

05Expressão e suscetibilidade

Receptores expressos
ERalfa-, ERbeta+, PR+ e ErbB2+

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS, 20 mM HEPES
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
Mantenha as culturas entre 5 e 10 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
C57BL/6