NG108-15

La lignée cellulaire NG108-15 est une lignée hybride neuroblastome × gliome bien caractérisée, obtenue par fusion du clone de neuroblastome de souris N18TG2 avec le clone de gliome de rat C6-BU-1. Cette fusion donne lieu à un type cellulaire qui exprime de manière marquée toute une gamme de propriétés de type neuronal, ce qui fait de la lignée NG108-15 un modèle largement utilisé pour la recherche neurobiologique et neuropharmacologique. Les cellules hybrides présentent un haut degré d’excitabilité électrique et expriment des enzymes neuronales telles que la choline acétyltransférase, ce qui permet la synthèse, le stockage et la libération d’acétylcholine. Ces cellules forment des prolongements étendus et sont capables de générer des potentiels d’action en réponse à une stimulation électrique ou chimique.

Il a été démontré que les cellules NG108-15 forment des synapses chimiques fonctionnelles avec des cellules musculaires, notamment des myotubes embryonnaires primaires de souris et des lignées clonales de myotubes telles que la lignée G-8. Dans des systèmes de co-culture, les cellules NG108-15 peuvent innerver les myotubes, produisant des potentiels synaptiques en réponse à des potentiels d’action provoqués. Ces réponses dépendent de l’acétylcholine et peuvent être bloquées par la d-tubocurarine, ce qui confirme la nature cholinergique des synapses. Il convient de noter que l’efficacité de la transmission synaptique varie, mais demeure physiologiquement significative, une proportion importante de potentiels d’action hybrides parvenant à induire une dépolarisation musculaire. Les réponses postsynaptiques sont étroitement reproduites par l’application iontophorétique d’acétylcholine, ce qui confirme davantage leur identité cholinergique.

Les cellules NG108-15 sont de grandes cellules de type neuronal, dotées de prolongements et présentant une morphologie de type neuroblastome. Elles présentent à la fois des caractéristiques caryotypiques de la souris et du rat, ainsi que des profils d’isoenzymes hybrides compatibles avec leur patrimoine génétique mixte. Ces cellules conservent des phénotypes de type neuronal même à des nombres de passages élevés, bien que certaines propriétés, telles que l’activité de la choline acétyltransférase, puissent diminuer avec le temps. Dans l’ensemble, les cellules NG108-15 sont considérées comme un modèle in vitro robuste pour l’étude de la différenciation neuronale, de la neurotransmission et de la synaptogenèse, en particulier dans le contexte de la signalisation médiée par l’acétylcholine.

Milieu : Le milieu de base utilisé pour cette lignée cellulaire est le milieu Eagle modifié de Dulbecco (GIBCO/InVitrogen, n° de catalogue 12100-061, DMEM sans pyruvate de sodium). Pour préparer le milieu de croissance complet, ajoutez les composants suivants au milieu de base :

• 0,1 mM d’hypoxanthine (concentration finale)
• 400 nM d’aminoptérine (concentration finale)
• 0,016 mM de thymidine (concentration finale)
• 10 % de sérum fœtal bovin (concentration finale)
• 1,5 g/L de bicarbonate de sodium

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.