NG108-15

A linhagem celular NG108-15 é uma linhagem híbrida de neuroblastoma × glioma bem caracterizada, obtida pela fusão do clone de neuroblastoma de camundongo N18TG2 com o clone de glioma de rato C6-BU-1. Essa fusão resulta em um tipo celular que expressa de forma robusta uma série de propriedades semelhantes às dos neurônios, tornando a NG108-15 um modelo amplamente utilizado para pesquisas neurobiológicas e neurofarmacológicas. As células híbridas apresentam um alto grau de excitabilidade elétrica e expressam enzimas neuronais, como a colina acetiltransferase, permitindo a síntese, o armazenamento e a liberação de acetilcolina. Essas células formam extensos processos e são capazes de gerar potenciais de ação em resposta a estímulos elétricos ou químicos.

Foi demonstrado que as células NG108-15 formam sinapses químicas funcionais com células musculares, incluindo tanto miotubos embrionários primários de camundongo quanto linhagens clonais de miotubos, como a G-8. Em sistemas de cocultura, as células NG108-15 podem inervar miotubos, produzindo potenciais sinápticos em resposta a potenciais de ação evocados. Essas respostas dependem da acetilcolina e podem ser bloqueadas pela d-tubocurarina, confirmando a natureza colinérgica das sinapses. Notavelmente, a eficiência da transmissão sináptica varia, mas permanece fisiologicamente significativa, com uma proporção significativa de potenciais de ação híbridos induzindo com sucesso a despolarização muscular. As respostas pós-sinápticas são fielmente reproduzidas pela aplicação iontoforética de acetilcolina, reforçando ainda mais sua identidade colinérgica.

As células NG108-15 são células grandes, semelhantes a neurônios, com processos e morfologia semelhante à do neuroblastoma. Elas exibem características cariotípicas tanto de camundongos quanto de ratos e apresentam padrões de isoenzimas híbridos, consistentes com sua origem genética mista. Essas células mantêm fenótipos semelhantes aos dos neurônios mesmo em números de passagem mais elevados, embora algumas propriedades, como a atividade da colina acetiltransferase, possam diminuir com o tempo. De modo geral, as células NG108-15 são consideradas um modelo in vitro robusto para o estudo da diferenciação neuronal, da neurotransmissão e da sinaptogênese, particularmente no contexto da sinalização mediada pela acetilcolina.

Meio: O meio de base para esta linhagem celular é o Meio de Eagle Modificado de Dulbecco (GIBCO/InVitrogen, nº de catálogo 12100-061, DMEM sem piruvato de sódio). Para preparar o meio de crescimento completo, adicione os seguintes componentes ao meio base:

• 0,1 mM de hipoxantina (concentração final)
• 400 nM de aminopterina (concentração final)
• 0,016 mM de timidina (concentração final)
• 10% de soro fetal bovino (concentração final)
• 1,5 g/L de bicarbonato de sódio

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.