NG108-15

La linea cellulare NG108-15 è una linea cellulare ibrida neuroblastoma × glioma ben caratterizzata, ottenuta dalla fusione del clone di neuroblastoma murino N18TG2 con il clone di glioma di ratto C6-BU-1. Da questa fusione deriva un tipo cellulare che esprime in modo marcato una serie di proprietà simili a quelle dei neuroni, rendendo NG108-15 un modello ampiamente utilizzato nella ricerca neurobiologica e neurofarmacologica. Le cellule ibride mostrano un alto grado di eccitabilità elettrica ed esprimono enzimi neuronali come la colina acetiltransferasi, consentendo la sintesi, l'immagazzinamento e il rilascio di acetilcolina. Queste cellule formano estesi processi e sono in grado di generare potenziali d'azione in risposta a stimoli elettrici o chimici.

È stato dimostrato che le cellule NG108-15 formano sinapsi chimiche funzionali con le cellule muscolari, inclusi sia i miotubi embrionali primari di topo che le linee di miotubi clonali come la G-8. Nei sistemi di co-coltura, le cellule NG108-15 possono innervare i miotubi, producendo potenziali sinaptici in risposta a potenziali d'azione evocati. Queste risposte dipendono dall'acetilcolina e possono essere bloccate dalla d-tubocurarina, a conferma della natura colinergica delle sinapsi. In particolare, l'efficienza della trasmissione sinaptica varia ma rimane fisiologicamente significativa, con una proporzione significativa di potenziali d'azione ibridi che inducono con successo la depolarizzazione muscolare. Le risposte postsinaptiche sono strettamente imitate dall'applicazione ionoforetica di acetilcolina, a ulteriore conferma della loro identità colinergica.

Le cellule NG108-15 sono cellule di grandi dimensioni, simili a neuroni, con processi e una morfologia simile a quella del neuroblastoma. Presentano caratteristiche cariotipiche sia del topo che del ratto e mostrano modelli di isoenzimi ibridi coerenti con il loro background genetico misto. Queste cellule mantengono fenotipi simili a quelli dei neuroni anche a numeri di passaggi più elevati, sebbene alcune proprietà, come l'attività della colina acetiltransferasi, possano diminuire nel tempo. Nel complesso, le cellule NG108-15 sono considerate un solido modello in vitro per lo studio della differenziazione neuronale, della neurotrasmissione e della sinaptogenesi, in particolare nel contesto della segnalazione mediata dall'acetilcolina.

Terreno di coltura: il terreno di base per questa linea cellulare è il Dulbecco's Modified Eagle's Medium (GIBCO/InVitrogen, codice catalogo 12100-061, DMEM senza piruvato di sodio). Per preparare il terreno di coltura completo, aggiungere al terreno di base i seguenti componenti:

• 0,1 mM di ipoxantina (concentrazione finale)
• 400 nM di aminopterina (concentrazione finale)
• 0,016 mM di timidina (concentrazione finale)
• 10% di siero fetale bovino (concentrazione finale)
• 1,5 g/L di bicarbonato di sodio

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia