NG108-15

A linha celular NG108-15 é uma linha celular híbrida de neuroblastoma × glioma bem caracterizada, obtida através da fusão do clone de neuroblastoma de ratinho N18TG2 com o clone de glioma de rato C6-BU-1. Esta fusão resulta num tipo celular que expressa de forma robusta uma série de propriedades semelhantes às dos neurónios, tornando a NG108-15 um modelo amplamente utilizado na investigação neurobiológica e neurofarmacológica. As células híbridas apresentam um elevado grau de excitabilidade elétrica e expressam enzimas neuronais, tais como a colina acetiltransferase, permitindo a síntese, armazenamento e libertação de acetilcolina. Estas células formam extensos processos e são capazes de gerar potenciais de ação em resposta a estímulos elétricos ou químicos.

Foi demonstrado que as células NG108-15 formam sinapses químicas funcionais com células musculares, incluindo tanto miotubos embrionários primários de ratinho como linhas de miotubos clonais, tais como a G-8. Em sistemas de cocultura, as células NG108-15 podem inervar miotubos, produzindo potenciais sinápticos em resposta a potenciais de ação evocados. Estas respostas dependem da acetilcolina e podem ser bloqueadas pela d-tubocurarina, confirmando a natureza colinérgica das sinapses. Notavelmente, a eficiência da transmissão sináptica varia, mas permanece fisiologicamente significativa, com uma proporção significativa de potenciais de ação híbridos a induzir com sucesso a despolarização muscular. As respostas pós-sinápticas são estreitamente imitadas pela aplicação iontoforética de acetilcolina, reforçando ainda mais a sua identidade colinérgica.

As células NG108-15 são células grandes, semelhantes a neurónios, com processos e uma morfologia semelhante à do neuroblastoma. Apresentam características cariotípicas tanto de ratos como de ratinhos e exibem padrões de isoenzimas híbridos consistentes com a sua origem genética mista. Estas células mantêm fenótipos semelhantes aos dos neurónios mesmo em números de passagem mais elevados, embora algumas propriedades, como a atividade da colina acetiltransferase, possam diminuir com o tempo. Em geral, as células NG108-15 são consideradas um modelo in vitro robusto para o estudo da diferenciação neuronal, neurotransmissão e sinaptogénese, particularmente no contexto da sinalização mediada pela acetilcolina.

Meio: O meio de base para esta linha celular é o Meio de Dulbecco Modificado de Eagle (GIBCO/InVitrogen, n.º de catálogo 12100-061, DMEM sem piruvato de sódio). Para preparar o meio de crescimento completo, adicione os seguintes componentes ao meio de base:

• 0,1 mM de hipoxantina (concentração final)
• 400 nM de aminopterina (concentração final)
• 0,016 mM de timidina (concentração final)
• 10% de soro fetal bovino (concentração final)
• 1,5 g/L de bicarbonato de sódio

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia