SRA01-04

קו התאים SRA01/04 הוא קו תאים אפיתליאליים של עדשת העין האנושית שהונצחו, אשר פותח כדי להתגבר על המגבלות הכרוכות בתרבויות ראשוניות של תאי אפיתל עדשת העין האנושית (HLE). מגבלות אלה כוללות את יכולת ההתפשטות הנמוכה שלהם ואת הקושי בהשגת כמויות מספיקות של תאים מעדשות של תורמים. SRA01/04 נגזר מתאי HLE ראשוניים שהופקו מתינוקות שעברו ניתוח לטיפול ברטינופתיה של פגים. הפיכתם לתאים בלתי-מתים הושגה באמצעות טרנספקציה עם פלסמיד הנושא את הגן לאנטיגן T הגדול של SV40 תחת בקרת הפרומוטור של RSV. גישה זו נמנעת משימוש בנגיף חי ומאפשרת בחירה של שיבוט אחיד בעל מאפיינים עקביים.

תאי SRA01/04 מפגינים התרבות יציבה לאורך 130 מעברים, עם קצב הכפלת אוכלוסייה של כ-3.5 לכל מעבר. מבחינה מורפולוגית, הם שומרים על שכבה חד-תאית בעלת מאפיינים אפיתליאליים. ניתוח כרומוזומלי חשף קריוטיפ היפוטטרפלואידי, התואם למעמד של תאים בלתי-מתים. הפנוטיפ האיזואנזימי אישר את מקורם האנושי. חשוב לציין כי קו התאים שומר על מאפיינים מולקולריים ספציפיים לעדשה, לרבות ביטוי של קריסטלינים מסוג αA ו-βB ואלדוז רדוקטאז, אם כי ברמות חלבון נמוכות יותר מאלה שנצפו בתרבויות HLE ראשוניות. mRNA לשני הקריסטלינים זוהה גם באמצעות RT-PCR, והריצוף אישר זהות של 100% לרצפים אנושיים שפורסמו. דבר זה הופך את SRA01/04 לקו התאים האנושי הראשון של עדשת העין שהוכח כי הוא מבטא את הקריסטלינים αA ו-βB.

בנוסף לביטוי הקריסטלינים, קו התאים SRA01/04 מבטא אלדוז רדוקטאז, אנזים המעורב במסלול הפוליולים, הרלוונטי להיווצרות קטרקט. אמנם צמיחה מיטבית דורשת 20% סרום עגלי, אך התאים יכולים לשרוד ולהתרבות ברמות סרום מופחתות או אפילו בתנאים נטולי סרום, אם הוצמדו מראש לצלחות תרבית. יכולת הסתגלות זו, יחד עם הפנוטיפ היציב הספציפי לעדשה, הופכת את SRA01/04 למודל בעל ערך לחקר הפיזיולוגיה של העדשה, ויסות גנים באפיתל העדשה, והמנגנונים העומדים בבסיס היווצרות הקטרקט.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו