SRA01-04

SRA01/04 세포주는 인간 수정체 상피(HLE) 세포의 1차 배양과 관련된 한계를 극복하기 위해 개발된 불멸화 인간 수정체 상피 세포주입니다. 이러한 한계에는 낮은 증식 능력과 기증자 수정체에서 충분한 양의 세포를 확보하기 어렵다는 점이 포함됩니다. SRA01/04는 미숙아 망막병증 수술을 받은 영아로부터 얻은 1차 HLE 세포에서 유래되었습니다. 불멸화는 RSV 프로모터의 조절을 받는 SV40 대형 T 항원 유전자를 보유한 플라스미드를 형질 도입함으로써 달성되었습니다. 이 접근 방식은 생바이러스의 사용을 피하며, 일관된 특성을 지닌 균일한 클론을 선별할 수 있게 해줍니다.

SRA01/04 세포는 130회 이상의 배양에 걸쳐 안정적인 증식을 보였으며, 배양당 세포 수 배가 수준은 약 3.5배였다. 형태학적으로, 이 세포들은 상피 특성을 지닌 단층을 유지한다. 염색체 분석 결과, 불멸화 상태와 일치하는 저사배체 핵형(hypotetraploid karyotype)이 확인되었다. 이소효소 표현형을 통해 이 세포주가 인간 유래임을 확인했다. 특히, 이 세포주는 αA- 및 βB-크리스탈린과 알도오스 환원효소의 발현을 포함하여 수정체 특이적 분자적 특징을 유지하고 있으나, 1차 HLE 배양에서 관찰된 것보다 단백질 수준은 낮다. RT-PCR을 통해 두 크리스탈린의 mRNA도 검출되었으며, 염기서열 분석 결과 발표된 인간 염기서열과 100% 일치함이 확인되었다. 이로써 SRA01/04는 αA- 및 βB-크리스탈린을 모두 발현하는 것으로 입증된 최초의 인간 수정체 세포주가 되었다.

크리스탈린 발현 외에도, SRA01/04는 백내장 발생과 관련된 폴리올 경로에 관여하는 효소인 알도오스 환원효소를 발현합니다. 최적의 성장을 위해서는 20%의 소 태아 혈청이 필요하지만, 배양 접시에 미리 부착된 상태라면 혈청 농도를 낮추거나 심지어 무혈청 조건에서도 세포가 생존하고 증식할 수 있다. 이러한 적응력과 안정적인 수정체 특이적 표현형을 바탕으로, SRA01/04는 수정체 생리학, 수정체 상피의 유전자 조절, 그리고 백내장 형성의 기전을 연구하는 데 유용한 모델이 됩니다.

37°C, 5%_CO2, 습한 대기.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

마이코플라스마 오염은 PCR 기반 분석법과 발광 기반 마이코플라스마 검출법을 모두 사용하여 배제합니다.

박테리아, 곰팡이 또는 효모 오염이 없는지 확인하기 위해 세포 배양은 매일 육안 검사를 거칩니다.

장기 보존을 위해서는 바이알을 약 -150°C에서 -196°C의 증기상 액체 질소에 넣으세요. 80°C에서 보관하는 것은 액체 질소로 옮기기 전 짧은 중간 단계로만 허용됩니다.

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

싸이티온은 제품의 품질과 생존력을 보증합니다. 당사는 당사 시설에서 배송된 후 60일 동안 배양 시작 시 세포가 생존할 수 있음을 보증합니다. 당사는 모든 재료가 분석 증명서 및/또는 제품 시트에 설명된 사양을 준수함을 보증합니다

자세한 내용은 <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">보증서 를 참조하시기 바랍니다