SRA01-04

Клетъчната линия SRA01/04 е иммортализирана линия от епителни клетки на човешкия кристалин, разработена с цел преодоляване на ограниченията, свързани с първичните култури от епителни клетки на човешкия кристалин (HLE). Тези ограничения включват ниската им пролиферативна способност и трудността при получаването на достатъчно количество клетки от донорски кристалини. SRA01/04 е получена от първични HLE клетки, взети от новородени, подложени на хирургична интервенция поради ретинопатия на недоносените. Безсмъртието е постигнато чрез трансфекция с плазмид, носещ гена на големия Т-антиген на SV40 под контрола на RSV промотора. Този подход избягва използването на жив вирус и позволява селекция на еднороден клон с постоянни характеристики.

Клетките SRA01/04 проявяват стабилна пролиферация през 130 пасажа с ниво на удвояване на популацията от приблизително 3,5 на пасаж. Морфологично те поддържат монослой с епителни характеристики. Хромозомният анализ разкри хипотетраплоиден кариотип, съответстващ на безсмъртния статус. Изоензимният фенотип потвърди човешкия им произход. Важно е да се отбележи, че клетъчната линия запазва специфичните за лещата молекулярни характеристики, включително експресията на αA- и βB-кристалини и алдозоредуктаза, макар и при по-ниски нива на протеини, отколкото се наблюдават в първичните култури на HLE. мРНК и за двата кристалина също беше открита чрез RT-PCR, а секвенирането потвърди 100% идентичност с публикувани човешки последователности. Това прави SRA01/04 първата установена човешка клетъчна линия от лещата, за която е доказано, че експресира както αA-, така и βB-кристалини.

В допълнение към експресията на кристалини, SRA01/04 експресира алдозоредуктаза – ензим, участващ в полиолния път, който е свързан с образуването на катаракта. Макар че за оптимален растеж са необходими 20% фетално телешко серум, клетките могат да оцелеят и да пролиферират при по-ниски нива на серум или дори в условия без серум, ако предварително са прикрепени към културални съдове. Тази адаптивност, заедно със стабилния им фенотип, специфичен за лещата, превръща SRA01/04 в ценен модел за изучаване на физиологията на лещата, генната регулация в епитела на лещата и механизмите, лежащи в основата на образуването на катаракта.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация