SRA01-04

Celična linija SRA01/04 je imortalizirana linija človeških epitelnih celic leče, razvita z namenom premagovanja omejitev, povezanih s primarnimi kulturami človeških epitelnih celic leče (HLE). Te omejitve vključujejo njihovo nizko sposobnost razmnoževanja ter težave pri pridobivanju zadostnih količin celic iz leč darovalcev. Linija SRA01/04 izhaja iz primarnih HLE-celic, pridobljenih iz dojenčkov, ki so se podvrgli operaciji zaradi retinopatije prezgodaj rojenih otrok. Nesmrtnost je bila dosežena s transfekcijo s plazmidom, ki nosi gen za velik T-antigen SV40 pod nadzorom promotorja RSV. Ta pristop preprečuje uporabo živega virusa in omogoča selekcijo enotnega klona z doslednimi lastnostmi.

Celice SRA01/04 kažejo stabilno proliferacijo skozi več kot 130 pasaz, s stopnjo podvojevanja populacije približno 3,5 na pasaz. Morfološko ohranjajo monosloj z epitelijskimi značilnostmi. Kromosomska analiza je razkrila hipotetraploidni kariotip, kar je skladno z imortaliziranim statusom. Fenotip izoenzimov je potrdil njihov človeški izvor. Pomembno je, da celična linija ohranja molekularne značilnosti, specifične za lečo, vključno z izražanjem αA- in βB-kristalinov ter aldosoreduktaze, čeprav na nižjih ravneh beljakovin kot v primarnih kulturah HLE. mRNA za oba kristalina je bila prav tako zaznana z metodo RT-PCR, sekvenciranje pa je potrdilo 100-odstotno identiteto z objavljenimi človeškimi sekvencami. S tem je SRA01/04 prva vzpostavljena človeška linija lečinih celic, za katero je bilo dokazano, da izraža tako αA- kot tudi βB-kristaline.

Poleg ekspresije kristalina linija SRA01/04 izraža tudi aldosno reduktazo, encim, vpleten v poliolno pot, ki je pomembna za nastanek katarakte. Čeprav za optimalno rast potrebujejo 20 % fetalnega govejega seruma, lahko celice preživijo in se razmnožujejo tudi pri zmanjšanih koncentracijah seruma ali celo v brezserumskih pogojih, če so predhodno pritrjene na kultivacijske posode. Ta prilagodljivost, skupaj z njihovim stabilnim fenotipom, značilnim za lečo, naredi linijo SRA01/04 dragocen model za preučevanje fiziologije leče, genetske regulacije v epitelu leče ter mehanizmov, ki so osnova za nastanek katarakte.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo