SRA01-04

SRA01/04 ląstelių linija yra nemirtinga žmogaus lęšiuko epitelio ląstelių linija, sukurta siekiant įveikti apribojimus, susijusius su pirminėmis žmogaus lęšiuko epitelio (HLE) ląstelių kultūromis. Šie apribojimai apima mažą ląstelių proliferacijos gebą ir sunkumus gauti pakankamą ląstelių kiekį iš donorų lęšiukų. SRA01/04 buvo gauta iš pirminių HLE ląstelių, paimtų iš naujagimių, kuriems buvo atliekama operacija dėl neišnešiotų naujagimių retinopatijos. Nemirtingumas buvo pasiektas transfekcijos būdu, naudojant plazmidę, kurioje yra SV40 didžiojo T antigeno genas, kontroliuojamas RSV promotoriaus. Šis metodas leidžia išvengti gyvo viruso naudojimo ir atrinkti vienodą kloną su pastoviomis savybėmis.

SRA01/04 ląstelės rodo stabilią proliferaciją per 130 pasėlių, o populiacijos padvigubėjimo lygis sudaro maždaug 3,5 per pasėlį. Morfologiškai jos išlaiko vieną sluoksnį su epitelinėmis savybėmis. Chromosomų analizė atskleidė hipotetraploidinį kariotipą, atitinkantį nemirtingą būseną. Izofermentų fenotipas patvirtino jų žmogiškąją kilmę. Svarbu pažymėti, kad ląstelių linija išlaiko lęšiui būdingas molekulinės savybes, įskaitant αA- ir βB-kristalinų bei aldozės reduktazės ekspresiją, nors baltymų lygis yra žemesnis nei pirminėse HLE kultūrose. Abiejų kristalinų mRNR taip pat buvo aptikta RT-PCR metodu, o sekvenavimas patvirtino 100 % tapatumą su paskelbtomis žmogaus sekvencijomis. Tai daro SRA01/04 pirmąją nustatytą žmogaus lęšiuko ląstelių liniją, kuri, kaip įrodyta, ekspresuoja tiek αA-, tiek βB-kristalinus.

Be kristalinių baltymų ekspresijos, SRA01/04 linija ekspresuoja aldosės reduktazę – fermentą, dalyvaujantį poliolių sintezės kelyje, kuris yra susijęs su katarakta. Nors optimaliam augimui reikalingas 20 % veršelių serumo, ląstelės gali išgyventi ir daugintis esant sumažintam serumo kiekiui arba netgi be serumo, jei jos iš anksto pritvirtintos prie kultūrinės lėkštelės. Šis prisitaikymas, kartu su stabiliu, lęšiui būdingu fenotipu, daro SRA01/04 vertingą modelį lęšio fiziologijos, genų reguliacijos lęšio epitelio ląstelėse ir katarakto susidarymo mechanizmų tyrimams.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime