SRA01-04

SRA01/04-solulinja on ikuistettu ihmisen mykiön epiteelisolulinja, joka on kehitetty ihmisen mykiön epiteelisolujen (HLE) primaariviljelmien rajoitusten voittamiseksi. Näihin rajoituksiin kuuluvat solujen heikko lisääntymiskyky sekä vaikeus saada riittävä määrä soluja luovuttajien mykiöistä. SRA01/04 on johdettu primaarisista HLE-soluista, jotka on saatu ennenaikaisen retinopatian vuoksi leikkaukseen joutuneilta vauvoilta. Ikuistaminen saavutettiin transfektiolla, jossa käytettiin plasmidiä, joka kantoi SV40-viruksen suurta T-antigeenigeeniä RSV-promoottorin ohjauksessa. Tämä menetelmä välttää elävän viruksen käytön ja mahdollistaa yhdenmukaisilla ominaisuuksilla varustetun klonin valinnan.

SRA01/04-solut lisääntyvät vakaasti yli 130 sukupolven ajan, ja populaation kaksinkertaistumistaso on noin 3,5 sukupolvea kohti. Morfologisesti ne säilyttävät epiteelille ominaisen yksikerroksisen rakenteen. Kromosomianalyysi paljasti hypotetraploidisen karyotyypin, mikä on sopusoinnussa ikuistuneen tilan kanssa. Isoentsyymifenotyyppi vahvisti solujen ihmisperäisyyden. Tärkeää on, että solulinja säilyttää mykiöspesifiset molekyyliset ominaisuudet, mukaan lukien αA- ja βB-kristalliinien sekä aldoosireduktaasin ilmentymisen, vaikkakin alhaisemmilla proteiinitasoilla kuin primaarisissa HLE-viljelmissä. Molempien kristalliinien mRNA havaittiin myös RT-PCR:n avulla, ja sekvensointi vahvisti 100-prosenttisen identiteetin julkaistujen ihmisen sekvenssien kanssa. Tämä tekee SRA01/04:stä ensimmäisen vakiintuneen ihmisen mykiösolulinjan, jonka on osoitettu ilmentävän sekä αA- että βB-kristalliineja.

Krystalliinien ilmentymisen lisäksi SRA01/04 ilmentää aldoosireduktaasia, polyolireitissä mukana olevaa entsyymiä, jolla on merkitystä kaihien syntymisessä. Vaikka optimaalinen kasvu vaatii 20 %:n pitoisuutta naudan sikiöseerumia, solut voivat selviytyä ja lisääntyä alennetuilla seerumipitoisuuksilla tai jopa seerumittomissa olosuhteissa, jos ne on kiinnitetty etukäteen viljelyastioihin. Tämä sopeutumiskyky yhdessä niiden vakaiden, linssikohtaisten fenotyyppien kanssa tekee SRA01/04:stä arvokkaan mallin linssin fysiologian, linssiepiteelin geenisäätelyn sekä kaihien muodostumisen taustalla olevien mekanismien tutkimiseen.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa