SRA01-04

A linha celular SRA01/04 é uma linha celular epitelial do cristalino humano imortalizada, desenvolvida para superar as limitações associadas às culturas primárias de células epiteliais do cristalino humano (HLE). Estas limitações incluem a sua baixa capacidade proliferativa e a dificuldade em obter quantidades suficientes de células a partir dos cristais de doadores. A SRA01/04 foi derivada de células HLE primárias obtidas de bebés submetidos a cirurgia para retinopatia da prematuridade. A imortalização foi alcançada através da transfecção com um plasmídeo portador do gene do antígeno T grande do SV40, sob o controlo do promotor RSV. Esta abordagem evita a utilização de vírus vivos e permite a seleção de um clone uniforme com características consistentes.

As células SRA01/04 apresentam uma proliferação estável ao longo de 130 passagens, com um nível de duplicação da população de aproximadamente 3,5 por passagem. Morfologicamente, mantêm uma monocamada com características epiteliais. A análise cromossómica revelou um cariótipo hipotetraplóide, consistente com o estado de imortalização. O fenótipo isoenzimático confirmou a sua origem humana. É importante referir que a linha celular mantém características moleculares específicas do cristalino, incluindo a expressão das cristalinas αA e βB e da aldose redutase, embora a níveis proteicos inferiores aos observados em culturas primárias de HLE. O ARNm de ambas as cristalinas foi também detetado por RT-PCR, e o sequenciamento confirmou uma identidade de 100% com sequências humanas publicadas. Isto torna a SRA01/04 a primeira linha celular de cristalino humano estabelecida que se demonstrou expressar tanto as cristalinas αA como as βB.

Para além da expressão de cristalinas, a SRA01/04 expressa aldose redutase, uma enzima envolvida na via dos polióis, que é relevante para a cataractogénese. Embora o crescimento ideal exija 20% de soro fetal bovino, as células conseguem sobreviver e proliferar com níveis reduzidos de soro ou mesmo em condições isentas de soro, se previamente fixadas em placas de cultura. Esta adaptabilidade, juntamente com o seu fenótipo estável específico do cristalino, torna a SRA01/04 um modelo valioso para o estudo da fisiologia do cristalino, da regulação genética no epitélio do cristalino e dos mecanismos subjacentes à formação da catarata.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia