SRA01-04

سلسلة الخلايا SRA01/04 هي سلسلة خلايا ظهارية للعدسة البشرية مُخلَّدة، تم تطويرها للتغلب على القيود المرتبطة بالمزرعات الأولية لخلايا الظهارة العدسية البشرية (HLE). وتشمل هذه القيود انخفاض قدرتها على التكاثر وصعوبة الحصول على كميات كافية من الخلايا من عدسات المتبرعين. وقد تم اشتقاق خط SRA01/04 من خلايا HLE الأولية التي تم الحصول عليها من رضع خضعوا لجراحة لعلاج اعتلال الشبكية لدى الخدج. وقد تم تحقيق الخلود عن طريق التحويل الجيني باستخدام بلازميد يحمل جين مستضد T الكبير لفيروس SV40 تحت تحكم مُحفز RSV. ويتجنب هذا النهج استخدام الفيروس الحي ويسمح باختيار نسخة مستنسخة موحدة ذات خصائص متسقة.

تُظهر خلايا SRA01/04 تكاثرًا مستقرًا على مدى 130 تمريرة، بمعدل مضاعفة للعدد يبلغ حوالي 3.5 لكل تمريرة. ومن الناحية المورفولوجية، تحافظ هذه الخلايا على طبقة أحادية ذات خصائص ظهارية. وكشف التحليل الكروموسومي عن نمط كروموسومي رباعي الصبغيات ناقص، وهو ما يتوافق مع حالة الخلود. وأكد النمط الظاهري للإيزوزيم أصلها البشري. والأهم من ذلك، أن خط الخلايا يحتفظ بالسمات الجزيئية الخاصة بالعدسة، بما في ذلك التعبير عن الكريستالينات αA وβB ومختزل الألدوز، وإن كان ذلك بمستويات بروتينية أقل مما لوحظ في مزارع HLE الأولية. كما تم الكشف عن الحمض النووي الريبي المرسال (mRNA) لكلا الكريستالينين عبر تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR)، وأكد التسلسل تطابقًا بنسبة 100٪ مع التسلسلات البشرية المنشورة. وهذا يجعل SRA01/04 أول سلالة خلوية معروفة من عدسة العين البشرية يُثبت أنها تعبر عن كل من الكريستالينات αA وβB.

بالإضافة إلى التعبير عن الكريستالينات، يعبر خط SRA01/04 عن إنزيم ألدوز ريدوكتاز، وهو إنزيم يشارك في مسار البوليول، والذي له صلة بتكوين إعتام عدسة العين. وفي حين أن النمو الأمثل يتطلب 20٪ من مصل الأجنة البقرية، فإن الخلايا يمكنها البقاء والتكاثر بمستويات مصل مخفضة أو حتى في ظروف خالية من المصل إذا تم تثبيتها مسبقًا على أطباق الاستزراع. هذه القدرة على التكيف، إلى جانب النمط الظاهري المستقر الخاص بالعدسة، تجعل من SRA01/04 نموذجًا قيّمًا لدراسة فسيولوجيا العدسة، وتنظيم الجينات في ظهارة العدسة، والآليات الكامنة وراء تكوّن إعتام عدسة العين.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان