SRA01-04

SRA01/04-cellelinjen er en immortalisert human linseepitelcellelinje som er utviklet for å overvinne begrensningene knyttet til primærkulturer av humane linseepitelceller (HLE-celler). Disse begrensningene omfatter deres lave proliferasjonsevne og vanskeligheten med å skaffe tilstrekkelige mengder celler fra donorlinser. SRA01/04 ble utviklet fra primære HLE-celler hentet fra spedbarn som gjennomgikk kirurgi for retinopati hos premature. Immortaliseringen ble oppnådd ved transfeksjon med et plasmid som bærer genet for det store T-antigenet fra SV40, under kontroll av RSV-promotoren. Denne tilnærmingen unngår bruk av levende virus og muliggjør seleksjon av en ensartet klon med konsistente egenskaper.

SRA01/04-cellene viser stabil proliferasjon over 130 passasjer med en populasjonsdoblingsfrekvens på omtrent 3,5 per passasje. Morfologisk opprettholder de et monolag med epiteliale egenskaper. Kromosomanalyse avdekket en hypotetraploid karyotype, noe som stemmer overens med en immortalisert status. Isozymfenotypen bekreftet deres menneskelige opprinnelse. Det er viktig å merke seg at cellelinjen beholder linsespesifikke molekylære trekk, inkludert uttrykk av αA- og βB-krystalliner og aldosereduktase, om enn på lavere proteinnivåer enn det som er observert i primære HLE-kulturer. mRNA for begge krystallinene ble også påvist ved hjelp av RT-PCR, og sekvensering bekreftet 100 % identitet med publiserte humane sekvenser. Dette gjør SRA01/04 til den første etablerte humane linsecellelinjen som har vist seg å uttrykke både αA- og βB-krystalliner.

I tillegg til krystallinuttrykk uttrykker SRA01/04 aldosereduktase, et enzym som er involvert i polyolveien, noe som er relevant for kataraktdannelse. Selv om optimal vekst krever 20 % føtalt bovint serum, kan cellene overleve og formere seg med reduserte serumnivåer eller til og med under serumfrie forhold dersom de er forhåndsfestet til dyrkingsskåler. Denne tilpasningsevnen, sammen med deres stabile linse-spesifikke fenotype, gjør SRA01/04 til en verdifull modell for å studere linsefysiologi, genregulering i linseepitelet og mekanismer som ligger til grunn for kataraktdannelse.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring