SRA01-04

SRA01/04 細胞系是一種永生化的人類晶狀體上皮細胞系，其開發旨在克服人類晶狀體上皮（HLE）細胞原代培養所面臨的限制。這些限制包括細胞增殖能力低，以及難以從捐贈者的晶狀體中獲得足量的細胞。 SRA01/04 源自接受早產兒視網膜病變手術的嬰兒所取得的原代 HLE 細胞。 該細胞系是透過轉染攜帶由 RSV 啟動子控制之 SV40 大 T 抗原基因的質體，而達成不朽化。此方法避免了使用活病毒，並能篩選出具有一致特徵的均一克隆。

SRA01/04 細胞在超過 130 代傳代過程中展現出穩定的增殖能力，每代傳代的細胞群倍增率約為 3.5。形態學上，它們維持著具有上皮特徵的單層結構。染色體分析顯示其具有次四倍體核型，與不朽化狀態相符。 同酶型表型證實了其人類來源。重要的是，該細胞系保留了晶狀體特異性的分子特徵，包括αA-和βB-晶狀體蛋白以及己糖還原酶的表達，儘管其蛋白質水平低於原代人晶狀體上皮（HLE）培養物。 透過逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）亦檢測到這兩種晶狀體蛋白的mRNA，且定序結果證實其與已發表的人類序列具100%同源性。這使得SRA01/04成為首個經證實同時表達αA型與βB型晶狀體蛋白的人類晶狀體細胞系。

除了晶狀體蛋白的表達外，SRA01/04 還表達參與多元醇代謝途徑的酶——己糖還原酶，該酶與白內障的形成有關。 雖然最佳生長需要 20% 的胎牛血清，但若預先附著於培養皿上，這些細胞即使在降低血清濃度或甚至無血清的條件下，仍能存活並增殖。 這種適應性，加上其穩定的晶狀體特異性表型，使 SRA01/04 成為研究晶狀體生理學、晶狀體上皮中的基因調控，以及白內障形成背後機制的重要模型。

37°C，5% CO_₂，加濕環境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。

為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。

冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。

在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。

詳情請參閱我們的 《保固聲明》。