SRA01-04

สายเซลล์ SRA01/04 เป็นสายเซลล์เยื่อบุผิวเลนส์ตาของมนุษย์ที่ได้รับการทำให้เป็นเซลล์อมตะ ซึ่งพัฒนาขึ้นเพื่อแก้ไขข้อจำกัดที่เกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงเซลล์เยื่อบุผิวเลนส์ตาของมนุษย์ (HLE) แบบปฐมภูมิ ข้อจำกัดเหล่านี้รวมถึงความสามารถในการเพิ่มจำนวนที่ต่ำ และความยากลำบากในการได้มาซึ่งเซลล์ในปริมาณที่เพียงพอจากเลนส์ตาของผู้บริจาค SRA01/04 มีต้นกำเนิดจากเซลล์ HLE ปฐมภูมิที่เก็บจากทารกที่เข้ารับการผ่าตัดรักษาโรคเรตินโอพาธีของทารกคลอดก่อนกำหนด การสร้างเซลล์ให้ไม่ตายได้สำเร็จโดยการถ่ายโอนพลาสมิดที่พกพา gen ของแอนติเจน T ขนาดใหญ่ของ SV40 ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ RSV วิธีนี้ช่วยหลีกเลี่ยงการใช้ไวรัสที่มีชีวิต และทำให้สามารถคัดเลือกโคลนที่มีลักษณะสม่ำเสมอได้

เซลล์ SRA01/04 แสดงการเพิ่มจำนวนที่เสถียรตลอด 130 ครั้งการเพาะเลี้ยง โดยมีอัตราการเพิ่มจำนวนประชากรประมาณ 3.5 ต่อครั้งการเพาะเลี้ยง ในด้านรูปร่างเซลล์ พวกมันรักษาชั้นเซลล์เดียวที่มีลักษณะของเซลล์เยื่อบุผิว การวิเคราะห์โครโมโซมแสดงให้เห็นถึงแบบโครโมโซมไฮโปเททราพลอยด์ ซึ่งสอดคล้องกับสถานะการทำให้เป็นเซลล์อมตะ ฟีโนไทป์ของไอโซไซม์ยืนยันว่าเซลล์ไลน์นี้มีต้นกำเนิดจากมนุษย์ สิ่งสำคัญคือ เซลล์ไลน์นี้ยังคงรักษาลักษณะโมเลกุลเฉพาะของเลนส์ตาไว้ รวมถึงการแสดงออกของ αA- และ βB-คริสตัลลิน และอัลโดสเรดักเทส แม้ว่าระดับโปรตีนจะต่ำกว่าที่พบในวัฒนธรรม HLE ปฐมภูมิ mRNA ของคริสตัลลินทั้งสองชนิดยังถูกตรวจพบผ่าน RT-PCR และการหาลำดับพันธุกรรมยืนยันความตรงกัน 100% กับลำดับพันธุกรรมของมนุษย์ที่เผยแพร่แล้ว ซึ่งทำให้ SRA01/04 เป็นสายเซลล์เลนส์มนุษย์สายแรกที่ได้รับการยืนยันว่าแสดงออกทั้ง αA- และ βB-คริสตัลลิน

นอกจากการแสดงออกของคริสตัลลินแล้ว SRA01/04 ยังแสดงออกของอัลโดสเรดักเทส ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับเส้นทางโพลีออล ซึ่งมีความเกี่ยวข้องกับการเกิดต้อกระจก แม้ว่าการเจริญเติบโตที่เหมาะสมที่สุดจะต้องการเซรั่มจากลูกวัว 20% แต่เซลล์เหล่านี้สามารถอยู่รอดและเพิ่มจำนวนได้แม้ในระดับเซรั่มที่ลดลง หรือแม้ในสภาพที่ไม่มีเซรั่มเลย หากถูกติดไว้บนจานเพาะเลี้ยงล่วงหน้า ความสามารถในการปรับตัวนี้ ร่วมกับลักษณะทางฟีโนไทป์ที่เฉพาะเจาะจงต่อเลนส์และมีความเสถียร ทำให้ SRA01/04 เป็นแบบจำลองที่มีค่าสำหรับการศึกษาสรีรวิทยาของเลนส์ การควบคุมยีนในเยื่อบุผิวเลนส์ และกลไกที่อยู่เบื้องหลังการเกิดต้อกระจก

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.