SRA01-04

Buněčná linie SRA01/04 je imortalizovaná linie buněk epitelu lidské čočky, která byla vyvinuta za účelem překonání omezení spojených s primárními kulturami buněk epitelu lidské čočky (HLE). Mezi tato omezení patří jejich nízká schopnost proliferace a obtížnost získání dostatečného množství buněk z čoček dárců. SRA01/04 byla odvozena z primárních HLE buněk získaných od kojenců podstupujících chirurgický zákrok z důvodu retinopatie předčasně narozených dětí. Imortalizace byla dosažena transfekcí plazmidem nesoucím gen pro velký T-antigen viru SV40 pod kontrolou promotoru RSV. Tento přístup vylučuje použití živého viru a umožňuje selekci jednotného klonu s konzistentními charakteristikami.

Buňky SRA01/04 vykazují stabilní proliferaci po dobu více než 130 pasáží s úrovní zdvojnásobení populace přibližně 3,5 na pasáž. Morfologicky si zachovávají monovrstvu s epiteliálními charakteristikami. Chromozomální analýza odhalila hypotetraploidní karyotyp, což odpovídá imortalizovanému stavu. Fenotyp izoenzymů potvrdil jejich lidský původ. Důležité je, že buněčná linie si zachovává molekulární znaky specifické pro oční čočku, včetně exprese krystalinů αA a βB a aldózoreduktázy, i když na nižší proteinové úrovni než v primárních kulturách HLE. mRNA pro oba krystaliny byla rovněž detekována pomocí RT-PCR a sekvenování potvrdilo 100% shodu s publikovanými lidskými sekvencemi. Díky tomu je SRA01/04 první zavedenou lidskou oční čočkovou buněčnou linií, u které bylo prokázáno, že exprimuje jak αA-, tak βB-krystaliny.

Kromě krystalinů exprimuje SRA01/04 také aldózreduktázu, enzym zapojený do polyolové dráhy, která hraje důležitou roli při vzniku katarakty. Ačkoli optimální růst vyžaduje 20 % fetálního bovinního séra, buňky mohou přežít a proliferovat i při snížených hladinách séra nebo dokonce v bezsérových podmínkách, jsou-li předem připevněny k kultivačním miskám. Díky této přizpůsobivosti a stabilnímu fenotypu specifickému pro oční čočku představuje linie SRA01/04 cenný model pro studium fyziologie oční čočky, genové regulace v epitelu oční čočky a mechanismů vedoucích k tvorbě katarakty.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení