SRA01-04

SRA01/04细胞系是一种永生化的人晶状体上皮细胞系，其开发旨在克服与人晶状体上皮（HLE）细胞原代培养相关的局限性。这些局限性包括细胞增殖能力低，以及难以从供体晶状体中获取足量的细胞。 SRA01/04 源自接受早产儿视网膜病变手术的婴儿体内的原代 HLE 细胞。 通过转染携带由RSV启动子控制的SV40大T抗原基因的质粒，实现了细胞的不朽化。这种方法避免了使用活病毒，并能够筛选出具有一致特性的均匀克隆。

SRA01/04细胞在超过130代传代过程中表现出稳定的增殖能力，每代传代的细胞倍增水平约为3.5。形态学上，它们保持着具有上皮特征的单层结构。染色体分析显示其核型为低四倍体，与不朽化状态一致。 同工酶表型证实了其人类来源。重要的是，该细胞系保留了晶状体特异性分子特征，包括αA型和βB型晶状体蛋白以及己糖还原酶的表达，尽管其蛋白水平低于原代人晶状体上皮细胞（HLE）培养物。 通过RT-PCR还检测到了这两种晶状体蛋白的mRNA，测序结果证实其与已发表的人类序列100%一致。这使得SRA01/04成为首个被证实同时表达αA型和βB型晶状体蛋白的人类晶状体细胞系。

除了晶状体蛋白的表达外，SRA01/04 还表达参与多元醇途径的酶——己糖还原酶，该途径与白内障的形成有关。 虽然最佳生长需要 20% 的胎牛血清，但如果预先附着在培养皿上，这些细胞即使在降低血清浓度甚至无血清条件下也能存活和增殖。 这种适应性，加上其稳定的晶状体特异性表型，使 SRA01/04 成为研究晶状体生理学、晶状体上皮中的基因调控以及白内障形成机制的宝贵模型。

37°C, 5%_CO2, 加湿环境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。

为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。

有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。