SRA01-04

Garis sel SRA01/04 adalah garis sel epitel lensa manusia yang diimortalkan, yang dikembangkan untuk mengatasi keterbatasan yang terkait dengan kultur primer sel epitel lensa manusia (HLE). Keterbatasan tersebut meliputi kapasitas proliferasi yang rendah serta kesulitan dalam memperoleh jumlah sel yang cukup dari lensa donor. SRA01/04 berasal dari sel HLE primer yang diperoleh dari bayi yang menjalani operasi untuk retinopati prematuritas. Imortalisasi dicapai melalui transfeksi dengan plasmid yang membawa gen antigen T besar SV40 di bawah kendali promotor RSV. Pendekatan ini menghindari penggunaan virus hidup dan memungkinkan seleksi klon seragam dengan karakteristik yang konsisten.

Sel SRA01/04 menunjukkan proliferasi yang stabil selama lebih dari 130 kali pemindahan kultur dengan tingkat penggandaan populasi sekitar 3,5 per pemindahan. Secara morfologis, sel-sel ini mempertahankan lapisan tunggal dengan karakteristik epitel. Analisis kromosom menunjukkan kariotipe hipotetraploid, yang sesuai dengan status abadi. Fenotipe isoenzim mengonfirmasi asal-usulnya dari manusia. Yang penting, garis sel ini mempertahankan ciri-ciri molekuler spesifik lensa, termasuk ekspresi kristalin αA dan βB serta aldose reduktase, meskipun pada tingkat protein yang lebih rendah dibandingkan dengan yang terlihat pada kultur HLE primer. mRNA untuk kedua kristalin tersebut juga terdeteksi melalui RT-PCR, dan sekuensing mengonfirmasi identitas 100% dengan urutan manusia yang telah dipublikasikan. Hal ini menjadikan SRA01/04 sebagai garis sel lensa manusia pertama yang terbukti mengekspresikan kristalin αA dan βB.

Selain ekspresi kristalin, SRA01/04 mengekspresikan aldose reduktase, enzim yang terlibat dalam jalur poliol, yang relevan dengan pembentukan katarak. Meskipun pertumbuhan optimal memerlukan 20% serum sapi janin, sel-sel ini dapat bertahan hidup dan berkembang biak dengan kadar serum yang lebih rendah atau bahkan dalam kondisi bebas serum jika telah ditempelkan terlebih dahulu pada wadah kultur. Kemampuan beradaptasi ini, bersama dengan fenotipe spesifik lensa yang stabil, menjadikan SRA01/04 sebagai model yang berharga untuk mempelajari fisiologi lensa, regulasi gen pada epitel lensa, dan mekanisme yang mendasari pembentukan katarak.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami