SRA01-04

SRA01/04細胞株は、ヒト水晶体上皮（HLE）細胞の初代培養に伴う制限を克服するために開発された、不死化ヒト水晶体上皮細胞株である。これらの制限には、増殖能が低いことや、ドナーの水晶体から十分な量の細胞を採取することが困難であることが含まれる。 SRA01/04は、未熟児網膜症の手術を受けた乳児から採取した一次HLE細胞から樹立されたものである。 不死化は、RSVプロモーターの制御下にあるSV40大型T抗原遺伝子をコードするプラスミドをトランスフェクションすることで達成された。この手法により、生ウイルスの使用を回避し、一貫した特性を持つ均一なクローンの選別が可能となる。

SRA01/04細胞は、130パッセージ以上にわたり安定した増殖を示し、1パッセージあたりの集団倍加数は約3.5である。形態学的には、上皮細胞の特徴を備えた単層を維持している。染色体解析により、不死化状態と一致する低四倍体核型が明らかになった。 アイソザイム表現型により、ヒト由来であることが確認された。重要な点として、この細胞株は、αA-およびβB-クリスタリンやアルドース還元酵素の発現を含む、水晶体特異的な分子的特徴を保持しているが、そのタンパク質発現レベルは初代ヒト水晶体細胞（HLE）培養に見られるものよりも低い。 RT-PCRにより、両方のクリスタリンのmRNAも検出され、シーケンシングにより、既報のヒト配列と100％同一であることが確認された。これにより、SRA01/04は、αA-およびβB-クリスタリンの両方を発現することが示された、初めて確立されたヒト水晶体細胞株となった。

クリスタリンの発現に加え、SRA01/04 は、白内障の発生に関与するポリオール経路に関与する酵素であるアルドース還元酵素も発現している。 最適な増殖には 20% のウシ胎児血清が必要ですが、培養皿に予め付着させておけば、血清濃度を低下させた条件や、さらには無血清条件下でも、細胞は生存・増殖することができます。 この適応性に加え、水晶体特異的な表現型が安定していることから、SRA01/04 は、水晶体の生理学、水晶体上皮における遺伝子発現調節、および白内障形成のメカニズムを研究するための貴重なモデルとなっています。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。