HTR-8/SVneo

A HTR-8/SVneo é uma linhagem celular trofoblástica humana derivada das vilosidades coriônicas de uma placenta do primeiro trimestre, especificamente de um embrião com 6 a 12 semanas de idade. Essas células foram imortalizadas por meio da transfecção com o gene que codifica o antígeno T grande do vírus simiano 40 (SV40), o que prolonga sua vida útil, mantendo as características típicas dos trofoblastos invasivos extravilosos. Essa linhagem celular expressa vários marcadores-chave associados aos trofoblastos extravilosos, incluindo o fator de crescimento semelhante à insulina II (IGF-II), NDOG-5, o antígeno nuclear de células proliferativas (PCNA) e uma variedade de integrinas (subunidades α1, α3, α5, αv e β1, juntamente com o receptor de vitronectina αvβ3/β5). Ela é negativa para o marcador de macrófagos 63/D3, o marcador de células endoteliais fator VIII e as subunidades de integrina α6 e β4, o que confirma sua linhagem trofoblástica e a distingue de outros tipos de células, como macrófagos e células endoteliais.

As células HTR-8/SVneo são amplamente utilizadas como modelo para estudar a invasão trofoblástica e a biologia placentária, particularmente a transição epitelial-mesenquimal (EMT), que é crucial para o comportamento invasivo dos trofoblastos durante o desenvolvimento placentário. Pesquisas demonstraram que essas células apresentam uma população mista de fenótipos epiteliais e mesenquimais, com a capacidade de sofrer EMT em condições padrão de cultura. Essa transição é mediada pela sinalização do TGF-β, que promove o fenótipo mesenquimal, conforme evidenciado pela regulação positiva de marcadores mesenquimais, como a vimentina, e pela regulação negativa de marcadores epiteliais, como a E-caderina. Isso torna o HTR-8/SVneo um valioso modelo in vitro para o estudo dos mecanismos moleculares subjacentes à EMT nos trofoblastos e suas implicações tanto no desenvolvimento normal da placenta quanto em distúrbios relacionados à gravidez.

Estudos demonstraram ainda que as células HTR-8/SVneo podem formar esferóides, que expressam predominantemente marcadores epiteliais. Quando esses esferóides são replantados em cultura 2D, as células exibem uma mudança em direção a um fenótipo mesenquimal, indicando um processo contínuo de EMT. As propriedades únicas dessa linhagem celular, incluindo sua responsividade ao TGF-β e sua natureza mista epitelial-mesenquimal, fornecem insights essenciais sobre a complexa dinâmica celular da invasão trofoblástica e a regulação do desenvolvimento placentário, oferecendo uma plataforma robusta para a investigação de patologias relacionadas à gravidez, como a pré-eclâmpsia e a restrição de crescimento intrauterino.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.