HTR-8/SVneo

HTR-8/SVneo er en human trofoblastcellelinje som stammer fra korionvilli fra en første trimester placenta, nærmere bestemt fra et 6-12 uker gammelt embryo. Disse cellene ble udødeliggjort ved å transfektere dem med genet som koder for det store T-antigenet fra simian virus 40 (SV40), noe som forlenger levetiden og samtidig opprettholder egenskaper som er typiske for ekstravilløse, invasive trofoblaster. Denne cellelinjen uttrykker flere viktige markører som assosieres med ekstravilløse trofoblaster, inkludert insulinlignende vekstfaktor II (IGF-II), NDOG-5, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) og en rekke integriner (α1, α3, α5, αv og β1 subenheter, sammen med αvβ3/β5 vitronektinreseptor). Den er negativ for makrofagmarkør 63/D3, endotelcellemarkør faktor VIII og α6- og β4-integrinsubenheter, noe som bekrefter dens trofoblastlinje og skiller den fra andre celletyper som makrofager og endotelceller.

HTR-8/SVneo-celler er mye brukt som modell for å studere trofoblastinvasjon og placentabiologi, spesielt epitelial-til-mesenkymal overgang (EMT), som er avgjørende for trofoblastenes invasive atferd under placentautviklingen. Forskning har vist at disse cellene har en blandet populasjon av epiteliale og mesenkymale fenotyper, med evne til å gjennomgå EMT under standard dyrkingsbetingelser. Denne overgangen medieres av TGF-β-signalering, som fremmer den mesenkymale fenotypen, noe som viser seg ved oppregulering av mesenkymale markører som vimentin og nedregulering av epitelmarkører som E-cadherin. Dette gjør HTR-8/SVneo til en verdifull in vitro-modell for å studere de molekylære mekanismene som ligger til grunn for EMT i trofoblaster, og implikasjonene dette har for både normal morkakeutvikling og svangerskapsrelaterte lidelser.

Studier har videre vist at HTR-8/SVneo-celler kan danne sfæroider, som hovedsakelig uttrykker epitelmarkører. Når disse sfæroidene plateres på nytt i 2D-kultur, viser cellene et skifte mot en mesenkymal fenotype, noe som tyder på en pågående EMT-prosess. Denne cellelinjens unike egenskaper, inkludert dens respons på TGF-β og dens blandede epiteliale og mesenkymale natur, gir viktig innsikt i den komplekse celledynamikken ved trofoblastinvasjon og reguleringen av placentautviklingen, og utgjør en robust plattform for å undersøke svangerskapsrelaterte patologier som preeklampsi og intrauterin vekstbegrensning.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring