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INS-1
Gewebe
Bauchspeicheldrüse, Langerhans-Inseln
Krankheit
Insulinom der Ratte
Synonyme
INS1

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INS-1

Cell line · Artikelnummer 300471

The INS-1 cell line is derived from an x-ray-created transplantable insulinoma in rats. Because INS-1 cells contain a high concentration of insulin and re...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die INS-1-Zelllinie stammt von einem durch Röntgenstrahlen erzeugten transplantierbaren Insulinom bei Ratten. Da INS-1-Zellen eine hohe Konzentration an Insulin enthalten und auf Veränderungen des Glukosespiegels reagieren, werden sie häufig zur Untersuchung der Funktion von Betazellen verwendet. Wachstum und Hormonexpression sind abhängig von dem Reduktionsmittel 2-Mercaptoethanol.

INS-1-Zellen zeichnen sich durch ihre Heterogenität aus. Sie bestehen aus reifen, Insulin-positiven Zellen und unreifen, bi-hormonalen Zellen, die Insulin- und Glucagon-Proteine exprimieren.

Bi-hormonale INS-1-Zellen weisen eine geringere Nkx6.1-Expression auf und haben keine Alphazellmarker, was darauf hindeutet, dass sie nicht vollständig ausgereift sind. Darüber hinaus reduziert eine chronische Glukosestimulation die Insulin-Gen- und -Proteinexpression in INS-1-Zellen. Infolgedessen sind die Spiegel von Insulin und von Proglucagon abgeleiteten Peptiden wie GLP-1, GLP-2 und Glucagon reduziert.

Gewebe
Bauchspeicheldrüse, Langerhans-Inseln
Krankheit
Insulinom der Ratte
Synonyme
  • INS1

02Klassifizierung

Organismus
Ratte
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Zelltyp
Betazelle

04Bezeichner

Quellenangabe
INS-1 (Cytion Katalognummer 300471)
NCBI-Steuer-ID
10116
Cellosaurus
CVCL_0352

05Expression und Anfälligkeit

Produkte
Insulin, Glutathion

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10 % hitzeinaktiviertem FBS, fügen Sie 2,5 g/L Glukose und 10 mM HEPES
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Die Suspensionszellen in einem 15-ml-Röhrchen sammeln und die anhaftenden Zellen vorsichtig mit PBS ohne Kalzium und Magnesium waschen (3-5 ml für T25-Kolben und 5-10 ml für T75-Kolben verwenden). Accutase auftragen (1-2 ml für T25-Kolben, 2,5 ml für T75-Kolben), um sicherzustellen, dass die Zellschicht vollständig bedeckt ist. Die Zellen 10 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubieren lassen. Nach der Inkubation sowohl die Suspension als auch die adhärenten Zellen mischen und zentrifugieren. Nach der Zentrifugation das Zellpellet vorsichtig resuspendieren und die Zellsuspension in neue Flaschen mit frischem Medium überführen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
NEDH
Alter des Spenders
666 Tage