Siirry sisältöön
INS-1
Kudos
Haima, Langerhansin saarekkeet
Sairaus
Rotan insulinoma
Synonyymit
INS1

Asiakirjat

INS-1

Cell line · Tuotenumero 300471

The INS-1 cell line is derived from an x-ray-created transplantable insulinoma in rats. Because INS-1 cells contain a high concentration of insulin and re...

€550.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa vähän
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

INS-1-solulinja on peräisin rotilla röntgensäteilyllä aikaansaadusta siirrettävästä insulinoomasta. Koska INS-1-solut sisältävät runsaasti insuliinia ja reagoivat glukoosipitoisuuden muutoksiin, niitä käytetään usein beetasolujen toiminnan tutkimiseen. Kasvu ja hormonin ilmentyminen ovat riippuvaisia pelkistävästä aineesta 2-merkaptoetanolista.

INS-1-solut ovat huomattavan heterogeenisiä, sillä ne koostuvat kypsistä insuliinipositiivisista soluista ja epäkypsistä bi-hormonaalisista soluista, jotka ilmentävät insuliini- ja glukagoniproteiineja.

Bi-hormonaalisilla INS-1-soluilla on vähäisempi Nkx6.1:n ilmentyminen, ja niiltä puuttuvat alfasolujen merkkiaineet, mikä osoittaa, etteivät ne ole täysin kypsyneet. Lisäksi krooninen glukoosistimulaatio vähentää insuliinigeenin ja -proteiinin ilmentymistä INS-1-soluissa. Näin ollen insuliinin ja proglukagonista peräisin olevien peptidien, kuten GLP-1:n, GLP-2:n ja glukagonin pitoisuudet vähenevät.

Kudos
Haima, Langerhansin saarekkeet
Sairaus
Rotan insulinoma
Synonyymit
  • INS1

02Luokittelu

Organismi
Rotta
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Solutyyppi
Beetasolu

04Tunnisteet

Lähdeviite
INS-1 (Cytionin luettelonumero 300471)
NCBI-verotunnus
10116
Cellosaurus
CVCL_0352

05Ilmentyminen ja alttius

Tuotteet
Insuliini, glutationi

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään väliaine 10 % lämpöinaktivoidulla FBS:llä, lisätään 2,5 g/l glukoosia ja 10 mM HEPES
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Kerää suspensiosolut 15 ml:n putkeen ja pese kiinni olevat solut varovasti PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia (3-5 ml T25-pulloissa ja 5-10 ml T75-pulloissa). Levitä Accutasea (1-2 ml T25-pulloihin, 2,5 ml T75-pulloihin) varmistaen, että solukerros peittyy kokonaan. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 10 minuuttia. Inkuboinnin jälkeen yhdistetään ja sentrifugoidaan sekä suspensio että adherentit solut. Sentrifugoinnin jälkeen solupelletti suspendoidaan varovasti uudelleen ja siirretään solususpensio uusiin pulloihin, jotka sisältävät tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Rotua / alalajia
NEDH
Luovuttajan ikä
666 päivää