Przejdź do treści
INS-1
Chusteczka
Trzustka, wysepki Langerhansa
Choroba
Insulinoma szczura
Synonimy
INS1

Dokumenty

INS-1

Cell line · Numer produktu 300471

The INS-1 cell line is derived from an x-ray-created transplantable insulinoma in rats. Because INS-1 cells contain a high concentration of insulin and re...

€550.00bez podatku i kosztów wysyłki
Niski stan magazynowy
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

Linia komórkowa INS-1 wywodzi się z przeszczepialnego insulinoma u szczurów. Ponieważ komórki INS-1 zawierają wysokie stężenie insuliny i reagują na zmiany poziomu glukozy, są one często wykorzystywane do badania funkcji komórek beta. Wzrost i ekspresja hormonów są zależne od czynnika redukującego 2-merkaptoetanolu.

Komórki INS-1 wyróżniają się heterogennością, składając się z dojrzałych komórek insulinododatnich i niedojrzałych komórek bi-hormonalnych wyrażających białka insuliny i glukagonu.

Bi-hormonalne komórki INS-1 mają niższą ekspresję Nkx6.1 i nie posiadają markerów komórek alfa, co wskazuje, że nie są w pełni dojrzałe. Co więcej, przewlekła stymulacja glukozą zmniejsza ekspresję genu i białka insuliny w komórkach INS-1. W związku z tym poziomy insuliny i peptydów pochodzących z proglukagonu, takich jak GLP-1, GLP-2 i glukagon, są obniżone.

Chusteczka
Trzustka, wysepki Langerhansa
Choroba
Insulinoma szczura
Synonimy
  • INS1

02Klasyfikacja

Organizm
Szczur
Seks
Mężczyzna
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Typ komórki
Komórka beta

04Identyfikatory

Źródło
INS-1 (numer katalogowy Cytion 300471)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_0352

05Ekspresja i podatność

Produkty
Insulina, glutation

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS inaktywowanym termicznie, dodać 2,5 g/l glukozy i 10 mM HEPES
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Zebrać komórki zawiesiny do probówki o pojemności 15 ml i delikatnie przemyć przylegające komórki PBS pozbawionym wapnia i magnezu (użyć 3-5 ml dla kolb T25 i 5-10 ml dla kolb T75). Nałożyć Accutase (1-2 ml na kolby T25, 2,5 ml na kolby T75), zapewniając pełne pokrycie warstwy komórek. Pozostawić komórki do inkubacji w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Po inkubacji połączyć i odwirować zarówno zawiesinę, jak i przylegające komórki. Po odwirowaniu ostrożnie zawiesić osad komórek i przenieść zawiesinę komórek do nowych kolb zawierających świeżą pożywkę.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Rasa / podgatunek
NEDH
Wiek dawcy
666 dni