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Células KHOS-NP
Pañuelo de papel
Hueso
Enfermedad
Osteosarcoma
Sinónimos
KHOS/NP, KHOS NP, KHOSNP, R-970-5, KHOS

Documentos

Células KHOS-NP

Cell line · Número de producto 300235

KHOS-NP es una línea celular derivada de la línea celular HOS mediante transformación con el virus del sarcoma murino de Kirsten (Ki-MSV). El proceso de transformación ha...

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01Información general

Descripción

KHOS-NP es una línea celular derivada de la línea celular HOS mediante transformación con el virus del sarcoma murino de Kirsten (Ki-MSV). El proceso de transformación ha dado lugar a una línea celular altamente tumorigénica que se caracteriza por varias propiedades distintivas, lo que la hace valiosa para aplicaciones de investigación específicas. En particular, las células KHOS-NP son especialmente útiles para producir pseudotipos MSV con diversos virus de leucemia murina ecotrópicos y xenotrópicos, lo que resulta de interés en estudios centrados en la replicación viral, la oncogénesis y las vías relacionadas.

Las células KHOS-NP presentan propiedades de crecimiento adherente y se derivan del tejido óseo de una mujer adulta de raza blanca. Las células portan el genoma Ki-MSV, pero no producen partículas virales infecciosas ni antígenos virales, lo que las hace seguras para determinados entornos de investigación in vitro en los que la producción de virus infecciosos sería motivo de preocupación. A pesar de ello, las células KHOS-NP mantienen una alta densidad de saturación y tienen una alta eficiencia de siembra en agar blando, lo que demuestra unas características de crecimiento proliferativo y independiente del anclaje robustas, típicas de las líneas celulares transformadas y tumorigénicas.

In vivo, las células KHOS-NP son altamente tumorigénicas, con una frecuencia del 100 % de formación de tumores observada en ratones desnudos en los 21 días posteriores a la inoculación cuando se inyectan 107 células por vía subcutánea. Estas propiedades hacen que la línea celular KHOS-NP sea un modelo valioso para estudiar el desarrollo del sarcoma, la biología tumoral y los mecanismos moleculares que subyacen a la oncogénesis. Sin embargo, es esencial señalar que las células KHOS-NP no son adecuadas para aplicaciones terapéuticas o in vivo, y su uso debe restringirse a condiciones experimentales controladas en un entorno de investigación.

Pañuelo de papel
Hueso
Enfermedad
Osteosarcoma
Sinónimos
  • KHOS/NP
  • KHOS NP
  • KHOSNP
  • R-970-5
  • KHOS

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Mujer
Propiedades de crecimiento
Adherente
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Morfología
Tipo fibroblasto
Tumorigénico
Sí, en ratones desnudos.

04Identificadores

Referencia
KHOS-NP (número de catálogo de Cytion 300235)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2546

05Manejo y cultivo

Medio de cultivo
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (número de artículo de Cytion 820100a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Suplementar el medio con un 10% de FBS y un 1% de NEAA
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Densidad de siembra
2 x 104 células/cm2
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Recuperación tras la descongelación
Después de descongelar, siembre las células a 5 x 104 células/cm2 y deje que las células se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

07Donante

Edad del donante
13 años
Origen étnico
Caucásico