Mine otse sisu juurde
Kude
Vaskulaarne endoteel

Dokumendid

PIEC

Cell line · Toote number 305213

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

PIEC (Porcine Iliac Endothelial Cells) on spontaanselt immortaliseeritud endoteelirakkude liin, mis on saadud noore sea niudearteri endoteelist. Rakuliinil on tüüpiline munakivimorfoloogia, kui see kasvab konfluentsini, ja moodustab standardse kultiveerimise tingimustes adhesiivseid monokihte. PIEC-rakud säilitavad peamised endoteeli omadused, sealhulgas kontakti inhibeerimise, endoteeli markerite (nt von Willebrandi faktor (vWF)) ekspressiooni ja võime moodustada kapillaaritaolisi struktuure sobivates in vitro testides. Oma vaskulaarse päritolu tõttu kasutatakse PIEC-rakke laialdaselt mudelina sigade endoteeli bioloogia ja peremees-patogeeni interaktsioonide uurimiseks.

Funktsionaalselt näitavad PIEC-id makrovaskulaarsete endoteelirakkudega sarnaseid omadusi, sealhulgas reageerivust põletikulistele stiimulitele ja võimet ekspresseerida leukotsüütide värbamisega seotud adhesiivmolekule. Neid on laialdaselt kasutatud viroloogilistes uuringutes, eriti sigade viiruste, nagu klassikalise sigade katku viiruse (CSFV), Aafrika sigade katku viiruse (ASFV) ja sigade reproduktiivse ja respiratoorse sündroomi viiruse (PRRSV) paljundamiseks ja uurimiseks. Nende kõrge vastuvõtlikkus teatud viirusnakkustele ja stabiilsed kasvutunnused muudavad need väärtuslikuks in vitro süsteemiks viirusreplikatsiooni uuringutes, viirusevastase sõelumise ja vaktsiiniuuringutes.

Lisaks nakkushaiguste rakendustele on PIEC-rakud asjakohane suurloomade endoteelirakkude mudel veresoonte barjäärifunktsiooni, endoteeli aktiveerumise, angiogeneesi ja põletikuliste signaalide edastamise uurimiseks. Seakasvatusest pärit endoteelirakkude liinina on PIEC-rakud asjakohased võrdlevate kardiovaskulaarsete uuringute ja prekliiniliste uuringute jaoks, kus tavaliselt kasutatakse seakasvatusmudeleid.

Kude
Vaskulaarne endoteel

02Klassifikatsioon

Organism
Siga
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteel

04Tunnused

Viide
PIEC (Cytioni katalooginumber 305213)
NCBI maksukood
9823
Cellosaurus
CVCL_C0W5

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendatakse keskkonda kuumuseliselt inaktiveeritud 10% FBS-iga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.