Pāriet uz saturu
Audums
Asinsvadu endotēlijs

Dokumenti

PIEC

Cell line · Preces numurs 305213

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

PIEC (cūku iegurņa endotēlija šūnas) ir spontāni imortalizēta endotēlija šūnu līnija, kas iegūta no jaunas cūkas iegurņa artērijas endotēlija. Šūnu līnija, augot līdz konfluencei, uzrāda tipisku bruģakmens morfoloģiju un standarta kultivēšanas apstākļos veido adhezīvas monoslāņus. PIEC saglabā galvenās endotēlija īpašības, tostarp kontakta inhibīciju, endotēlija marķieru, piemēram, von Willebrand faktora (vWF), ekspresiju un spēju veidot kapilāru līdzīgas struktūras atbilstošos in vitro testos. Savas asinsvadu izcelsmes dēļ PIEC plaši izmanto kā modeli cūku endotēlija bioloģijas un saimnieka-patogēna mijiedarbības pētījumiem.

Funkcionāli PIEC izrāda pazīmes, kas atbilst makrovaskulārajām endotēlija šūnām, tostarp reaģētspēju uz iekaisuma stimuliem un spēju ekspresēt adhezijas molekulas, kas iesaistītas leikocītu rekrutēšanā. Tās ir plaši izmantotas viroloģijas pētījumos, jo īpaši cūku vīrusu, piemēram, klasiskā cūku mēra vīrusa (CSFV), Āfrikas cūku mēra vīrusa (ASFV) un cūku reproduktīvā un respiratorā sindroma vīrusa (PRRSV), pavairošanai un pētīšanai. To augstā uzņēmība pret noteiktām vīrusu infekcijām un stabilās augšanas īpašības padara tās par vērtīgu in vitro sistēmu vīrusu replikācijas pētījumiem, pretvīrusu skrīningam un vakcīnu pētījumiem.

Papildus infekcijas slimību pētījumiem PIEC kalpo kā atbilstošs lielu dzīvnieku endotēlija modelis asinsvadu barjeras funkcijas, endotēlija aktivācijas, angiogēnēzes un iekaisuma signālu ceļu izpētei. Kā cūku izcelsmes endotēlija līnija PIEC nodrošina translacionālu nozīmi salīdzinošos kardiovaskulāros pētījumos un pirmsklīniskos pētījumos, kuros parasti izmanto cūku modeļus.

Audums
Asinsvadu endotēlijs

02Klasifikācija

Organisms
Cūka
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija

04Identifikatori

Atsauce
PIEC (Cytion kataloga numurs 305213)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9823
Cellosaurus
CVCL_C0W5

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar termiski inaktivētu 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.