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HMy2.CIR
Tessuto
B-Linfoblasto
Sinonimi
Hmy.2 CIR, HMy2.CIR, C1R

Documenti

HMy2.CIR

Cell line · Codice prodotto 305126

The HMy2.CIR cell line was developed through gamma irradiation and subsequent selection for the loss of HLA class I antigen expression from the HMy.2 B ly...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HMy2.CIR è stata sviluppata attraverso l'irradiazione gamma e la successiva selezione per la perdita dell'espressione dell'antigene HLA di classe I dalla linea cellulare linfoblastoide HMy.2 B. Questa linea cellulare parentale è un mutante a rapida crescita derivato dalla linea cellulare ARH-77. Le cellule HMy2.CIR sono particolarmente preziose come ospiti per i geni trasfettati dell'antigene maggiore di istocompatibilità di classe I, offrendo una piattaforma versatile per lo studio della presentazione dell'antigene e dei meccanismi di risposta immunitaria.

La linea cellulare ARH-77, da cui è derivata la HMy2.CIR, è nota per essere positiva all'antigene nucleare di Epstein-Barr (EBNA+) e all'antigene del capside virale di Epstein-Barr (EBVCA+). Di conseguenza, si presume che anche la linea cellulare HMy2.CIR sia positiva all'EBNA. Questa linea cellulare è caratterizzata dall'espressione di piccole quantità di HLA Cw4, ma non esprime prodotti del locus HLA A o B. Questo profilo cellulare unico rende la linea HMy2.CIR positiva all'EBNA. Questo profilo unico di espressione dell'antigene rende le cellule HMy2.CIR un modello utile per la ricerca immunologica, in particolare per lo studio dell'elaborazione e della presentazione dell'antigene limitata alla classe HLA I.

Tessuto
B-Linfoblasto
Sinonimi
  • Hmy.2 CIR
  • HMy2.CIR
  • C1R

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Linfoblasto

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HMy2.CIR (numero di catalogo Cytion 305126)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_3714

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
IMDM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 25 mM di HEPES, w: 1,0 mM di piruvato di sodio, w: 3,024 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820800a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Subcoltura
Omogeneizzare delicatamente la sospensione cellulare nel pallone pipettando verso l'alto e verso il basso, quindi prelevare un campione rappresentativo per determinare la densità cellulare per ml. Diluire la sospensione per ottenere una concentrazione cellulare di 1 x 105 cellule/ml con terreno di coltura fresco e aliquotare la sospensione regolata in nuovi palloni per l'ulteriore coltivazione.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
33 anni
Etnia
Caucasico