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M-MSV-Balb/3T3
Tecido
Embrionário
Sinónimos
M-MSV-BALB/3T3

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M-MSV-Balb/3T3

Cell line · Número do produto 400458

A linha celular M-MSV-Balb/3T3 é uma linha de fibroblastos de ratinho derivada de ratinhos BALB/c. Estas células são amplamente utilizadas na investigação devido ao seu crescimento estável...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular M-MSV-Balb/3T3 é uma linha celular de fibroblastos de ratinho derivada de ratinhos BALB/c. Estas células são amplamente utilizadas na investigação devido às suas caraterísticas de crescimento estável e ao seu fundo genético bem caracterizado. São originárias da linha celular 3T3, que é uma linha celular de fibroblastos padrão estabelecida a partir de tecido embrionário de ratinho. As células M-MSV-Balb/3T3 foram transformadas pelo vírus do Sarcoma Murino de Moloney (M-MSV), o que as torna uma ferramenta valiosa para o estudo da oncogénese viral, das vias de transdução de sinal e dos mecanismos moleculares subjacentes à transformação celular e à tumorigénese.

A transformação pelo M-MSV confere a estas células uma série de propriedades oncogénicas, incluindo o aumento das taxas de proliferação, a perda da inibição de contacto e a capacidade de formar colónias em ágar macio, que são caraterísticas da transformação maligna. Estas caraterísticas tornam as células M-MSV-Balb/3T3 particularmente úteis para estudos in vitro sobre a biologia do cancro, incluindo a identificação de oncogenes e genes supressores de tumores, bem como o teste de potenciais terapias anticancerígenas. Além disso, a sua utilização em experiências de transfecção permite a exploração da função e regulação dos genes no contexto de um fenótipo transformado.

Tecido
Embrionário
Sinónimos
  • M-MSV-BALB/3T3

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This murine fibroblast cell line (M-MSV-Balb/3T3) contains Moloney murine sarcoma virus (MOMSV) sequences introduced via transfection, without production of infectious virus, supporting transformed growth. The viral sequences are stably present in Balb/3T3-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Tipo fibroblastos
Tipo de célula
Fibroblastos
Tumorigénico
Sim

04Identificadores

Referência
M-MSV-Balb/3T3 (número de catálogo Cytion 400458)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5793

05Expressão e suscetibilidade

Expressão do antígeno
H-2d
Vírus
Vírus da ectromelia (varíola do rato): negativo.
Transcriptase reversa
Negativo

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
0,7 a 1 x 106 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
BALB/c
Idade do dador
Embrião, 14 a 17 dias de gestação