M-07e

A linha celular M-07e é uma sub-linha derivada da linha celular leucémica humana M-07 original, que foi estabelecida a partir do sangue periférico de uma menina de 6 meses de idade diagnosticada com leucemia megacarioblástica aguda (AML M7). Esta sub-linha específica foi isolada para criar uma linha celular dependente de factores que requer interleucina-3 (IL-3) ou fator estimulador de colónias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) para crescer, mesmo na presença de soro fetal de vitelo. As células M-07e exibem uma proliferação robusta em resposta a uma variedade de citocinas, incluindo GM-CSF, interferões (IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gama), IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-15, fator de crescimento dos nervos (NGF), fator de células estaminais (SCF), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-alfa) e trombopoietina (TPO). No entanto, a sua dependência de IL-3 ou GM-CSF para um crescimento sustentado torna-as uma ferramenta valiosa em bioensaios concebidos para medir a atividade biológica destas citocinas específicas.

Nomeadamente, as células M-07e são altamente sensíveis à IL-3 e ao GM-CSF, o que as torna ideais para utilização em ensaios em que a deteção de níveis baixos destas citocinas é crucial. Por exemplo, os bioensaios que utilizam células M-07e podem detetar apenas 25-50 pg/mL de IL-3 ou GM-CSF, o que os torna comparáveis ou mesmo mais sensíveis do que os ensaios tradicionais, como os ensaios de proliferação de blastos CFU-GM ou CML. No entanto, a linha celular tem tendência para se tornar independente de citocinas no espaço de 3-4 semanas em cultura, provavelmente devido ao crescimento de subpopulações independentes de citocinas, o que sugere que é necessária uma monitorização cuidadosa quando se utilizam estas células para estudos a longo prazo. A disponibilidade de dados sobre o exoma e a sequência de ARN aumenta ainda mais a utilidade das células M-07e na investigação centrada na leucemia e na hematopoiese.

As células M-07e também foram utilizadas para estabelecer um bioensaio quantitativo para GM-CSF e IL-3, o que é essencial tanto em contextos clínicos como de investigação. O bioensaio desenvolvido com esta linha celular provou ser conveniente, fiável e sensível, o que o torna particularmente útil para avaliar os efeitos farmacológicos das terapias com factores de crescimento hematopoiético. A reatividade detalhada das células M-07e a várias citocinas, combinada com as suas caraterísticas de crescimento bem documentadas, sublinha o seu valor em hematologia experimental, particularmente em estudos relacionados com a leucemia e a aplicação terapêutica de citocinas.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia