B-LCL-HROC60

La lignée cellulaire B-LCL-HROC60 est une lignée de lymphoblastes B humains immortalisée par le virus d’Epstein-Barr (EBV), établie à partir de lymphocytes B infiltrant la tumeur (TiBc) isolés d’un carcinome colorectal primaire désigné HROC60. La tumeur d’origine provenait d’un patient adulte de sexe masculin atteint d’un carcinome colorectal du côté droit, de sous-type moléculaire à phénotype de méthylation élevé des îlots CpG (CIMP-H). Le tissu tumoral frais a été dissocié mécaniquement pour obtenir des suspensions de cellules individuelles, et les cellules B ont été immortalisées de manière sélective in vitro à l’aide d’un surnageant contenant l’EBV, dérivé de la lignée cellulaire de marmouset B95/8, en présence de cyclosporine A afin de supprimer la prolifération des cellules T et des cellules NK. L’expansion à long terme a donné lieu à une culture de cellules B monoclonales, comme l’a confirmé l’analyse du réarrangement des gènes des chaînes lourdes et légères d’immunoglobulines à l’aide de tests de clonalité normalisés.

La lignée B-LCL-HROC60 sécrète de l’immunoglobuline M (IgM) comme isotype dominant, avec une production stable tout au long de la culture prolongée. Dans l’ensemble plus large des lignées de cellules B infiltrant la tumeur générées à partir d’un carcinome colorectal, la sécrétion d’immunoglobulines s’est limitée à un seul isotype principal par clone, et aucune prolifération spontanée ne s’est produite en l’absence d’EBV exogène, ce qui exclut une transformation in vivo induite par l’EBV latent. En tant que lignée monoclonale dérivée de TiBc ayant été exposée à un antigène et issue d’un carcinome colorectal CIMP-H, la lignée B-LCL-HROC60 constitue un modèle in vitro pertinent pour l’étude des réponses immunitaires humorales au sein du microenvironnement tumoral colorectal et pour la caractérisation des propriétés fonctionnelles des anticorps dérivés de lymphocytes B infiltrant la tumeur.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.