B-LCL-HROC60

B-LCL-HROC60 è una linea cellulare linfoblastoide B umana immortalizzata dal virus di Epstein-Barr (EBV) ottenuta da cellule B infiltranti il tumore (TiBc) isolate da un carcinoma colorettale primario denominato HROC60. Il tumore parentale proveniva da un paziente maschio adulto affetto da carcinoma colorettale destro del sottotipo molecolare CpG island methylator phenotype-high (CIMP-H). Il tessuto tumorale fresco è stato dissociato meccanicamente per ottenere sospensioni di cellule singole e le cellule B sono state immortalizzate selettivamente in vitro utilizzando il supernatante contenente EBV derivato dalla linea cellulare B95/8 marmoset in presenza di ciclosporina A per sopprimere la crescita delle cellule T e NK. L'espansione a lungo termine ha portato a una coltura di cellule B monoclonali, come confermato dall'analisi del riarrangiamento dei geni delle catene pesanti e leggere delle immunoglobuline utilizzando test di clonalità standardizzati.

B-LCL-HROC60 secerne immunoglobulina M (IgM) come isotipo dominante, con produzione stabile durante la coltura prolungata. In tutta la serie più ampia di linee cellulari B infiltranti il tumore generate dal carcinoma colorettale, la secrezione di immunoglobulina era limitata a un unico isotipo principale per clone e non si è verificata alcuna crescita spontanea in assenza di EBV esogeno, escludendo la trasformazione latente in vivo guidata dall'EBV. In quanto linea monoclonale derivata da TiBc con esperienza antigenica da un carcinoma colorettale CIMP-H, B-LCL-HROC60 fornisce un modello in vitro rilevante per lo studio delle risposte immunitarie umorali all'interno del microambiente tumorale colorettale e per la caratterizzazione delle proprietà funzionali degli anticorpi derivati dalle cellule B infiltranti il tumore.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia