B-LCL-HROC60

B-LCL-HROC60 on Epstein-Barr viirusega (EBV) immortaliseeritud inimese B-lümfoblastoidne rakuliin, mis on loodud primaarse kolorektaalse kartsinoomi HROC60-st isoleeritud kasvajasse infiltreerunud B-rakkudest (TiBc). Vanem kasvaja pärines täiskasvanud meespatsiendilt, kellel oli CpG-saarte metülatsioonifenotüübi kõrge (CIMP-H) molekulaarse alatüübiga parempoolne kolorektaalne kartsinoom. Värske kasvajakoest eraldati mehaaniliselt ühe raku suspensioonid ja B-rakud immortaliseeriti selektiivselt in vitro, kasutades EBV-d sisaldavat supernatanti, mis saadi B95/8 marmoseti rakuliinist tsüklosporiini A juuresolekul, et pärssida T- ja NK-rakkude kasvu. Pikaajaline paljunemine viis monoklonaalse B-rakkude kultuuri tekkeni, mis kinnitati immunoglobuliini raske ja kerge ahela geeni ümberkorralduse analüüsiga, kasutades standardiseeritud kloonaalsuse analüüse.

B-LCL-HROC60 eritab immunoglobuliini M (IgM) kui domineerivat isotüüpi, mille tootmine on pikaajalise kultiveerimise jooksul stabiilne. Kõikides kolorektaalse kartsinoomi põhjal loodud kasvajasse infiltreeruvate B-rakuliinide seerias oli immunoglobuliini eritus piiratud ühe peamise isotüübiga klooni kohta ning eksogeense EBV puudumisel ei toimunud spontaanset kasvu, välistades latentset in vivo EBV-põhjustatud transformatsiooni. CIMP-H kolorektaalse kartsinoomi monoklonaalse, antigeeniga kokku puutunud TiBc-st pärineva liinina pakub B-LCL-HROC60 asjakohast in vitro mudelit kolorektaalse kasvaja mikrokeskkonna humoraalse immuunvastuse uurimiseks ja kasvajasse imbunud B-rakkudest pärinevate antikehade funktsionaalsete omaduste iseloomustamiseks.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest