B-LCL-HROC60

B-LCL-HROC60 es una línea celular linfoblastoide B humana inmortalizada por el virus de Epstein-Barr (VEB), establecida a partir de células B infiltrantes de tumor (TiBc) aisladas de un carcinoma colorrectal primario denominado HROC60. El tumor original provenía de un paciente adulto del sexo masculino con carcinoma colorrectal del lado derecho del subtipo molecular de fenotipo de metilación de islas CpG alto (CIMP-H). El tejido tumoral fresco se disoció mecánicamente para obtener suspensiones de células individuales, y las células B se inmortalizaron selectivamente in vitro utilizando sobrenadante que contenía VEB, derivado de la línea celular de marmoseta B95/8, en presencia de ciclosporina A para suprimir el crecimiento de las células T y NK. La expansión a largo plazo dio como resultado un cultivo monoclonal de células B, lo cual se confirmó mediante el análisis de la reorganización de los genes de las cadenas pesadas y ligeras de la inmunoglobulina utilizando ensayos de clonalidad estandarizados.

La línea B-LCL-HROC60 secreta inmunoglobulina M (IgM) como su isotipo dominante, con una producción estable a lo largo de un cultivo prolongado. En la serie más amplia de líneas celulares de células B infiltrantes de tumores generadas a partir de carcinoma colorrectal, la secreción de inmunoglobulina se limitó a un único isotipo principal por clon, y no se produjo crecimiento espontáneo en ausencia de VEB exógeno, lo que descarta una transformación impulsada por el VEB latente in vivo. Como línea monoclonal derivada de TiBc expuesta a antígenos, procedente de un carcinoma colorrectal CIMP-H, la B-LCL-HROC60 ofrece un modelo in vitro relevante para investigar las respuestas inmunitarias humorales dentro del microambiente tumoral colorrectal y para caracterizar las propiedades funcionales de los anticuerpos derivados de células B infiltrantes del tumor.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.