B-LCL-HROC60

B-LCL-HROC60 är en Epstein-Barr-virus (EBV)-immortaliserad human B-lymfoblastoidcellinje som etablerats från tumörinfiltrerande B-celler (TiBc) isolerade från ett primärt kolorektalt karcinom benämnt HROC60. Den ursprungliga tumören härstammar från en vuxen manlig patient med höger-sidig kolorektal karcinom av den molekylära subtypen CpG island methylator phenotype-high (CIMP-H). Färsk tumörvävnad dissocierades mekaniskt för att erhålla encellssuspensioner, och B-cellerna immortaliserades selektivt in vitro med hjälp av EBV-innehållande supernatant härrörande från B95/8-marmosetcellinjen i närvaro av cyklosporin A för att undertrycka T- och NK-cellernas tillväxt. Långvarig expansion resulterade i en monoklonal B-cellskultur, vilket bekräftades genom analys av omarrangemang av immunoglobulins tunga och lätta kedjor med hjälp av standardiserade klonalitetsanalyser.

B-LCL-HROC60 utsöndrar immunoglobulin M (IgM) som sin dominerande isotyp, med stabil produktion under långvarig odling. I den bredare serien av tumörinfiltrerande B-cellinjer genererade från kolorektal karcinom var immunoglobulinutsöndringen begränsad till en enda huvudsaklig isotyp per klon, och ingen spontan tillväxt inträffade i frånvaro av exogent EBV, vilket utesluter latent in vivo EBV-driven transformation. Som en monoklonal, antigenerfaren TiBc-härledd linje från ett CIMP-H kolorektalt karcinom, utgör B-LCL-HROC60 en relevant in vitro-modell för att undersöka humorala immunsvar inom den kolorektala tumörmikromiljön och för att karakterisera funktionella egenskaper hos tumörinfiltrerande B-cell-härledda antikroppar.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring