B-LCL-HROC60

B-LCL-HROC60 é uma linha celular linfoblastóide B humana imortalizada pelo vírus Epstein-Barr (EBV), estabelecida a partir de células B infiltrantes de tumor (TiBc) isoladas de um carcinoma colorretal primário designado HROC60. O tumor parental teve origem num doente adulto do sexo masculino com carcinoma colorretal do lado direito do subtipo molecular CpG island methylator phenotype-high (CIMP-H). O tecido tumoral fresco foi dissociado mecanicamente para obter suspensões de células únicas, e as células B foram imortalizadas seletivamente in vitro usando sobrenadante contendo EBV derivado da linha celular B95/8 de saguis na presença de ciclosporina A para suprimir o crescimento de células T e NK. A expansão a longo prazo resultou numa cultura de células B monoclonais, conforme confirmado pela análise do rearranjo dos genes das cadeias pesadas e leves da imunoglobulina utilizando ensaios de clonalidade padronizados.

O B-LCL-HROC60 secreta imunoglobulina M (IgM) como seu isotipo dominante, com produção estável ao longo de uma cultura prolongada. Em toda a série mais ampla de linhas de células B infiltrantes de tumor geradas a partir de carcinoma colorretal, a secreção de imunoglobulina foi restrita a um único isotipo principal por clone, e nenhum crescimento espontâneo ocorreu na ausência de EBV exógeno, excluindo a transformação latente in vivo induzida por EBV. Como uma linha monoclonal derivada de TiBc com experiência em antígenos de um carcinoma colorretal CIMP-H, a B-LCL-HROC60 fornece um modelo in vitro relevante para investigar respostas imunes humorais dentro do microambiente tumoral colorretal e para caracterizar propriedades funcionais de anticorpos derivados de células B infiltrantes do tumor.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia