Skip to content
תאי NCH644
Tissue
מוח
Disease
גליובלסטומה

Documents

תאי NCH644

Cell line · Product number 300124

The NCH644 cell line is a glioblastoma stem-like cell line derived from patient tumors that lack EGFR amplification, making it a valuable model for studyi...

US$800.00excl. tax and shipping
Made to order
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

קו התאים NCH644 הוא קו תאים דמוי גזע של גליובלסטומה, שמקורו בגידולים של חולים ללא הגברה של EGFR, מה שהופך אותו למודל חשוב לחקר הביולוגיה של גליובלסטומה, במיוחד בהקשר של איתות גורמי גדילה ותכונות תאי גזע. מחקרים הראו כי בתאי NCH644, גורם הגדילה הבסיסי של פיברובלסטים (bFGF) ממלא תפקיד משמעותי בתיווך הגדילה ובשמירה על מאפייני תאי הגזע, בעוד שגורם הגדילה האפידרמלי (EGF) אינו מראה השפעות דומות. תאי NCH644 מגיבים ל-bFGF על ידי הגברת הביטוי של סמנים של תאי גזע כגון CD133 ו-nestin, והם גם מפגינים עמידות מוגברת לאפופטוזיס. עמידות זו, בשילוב עם היעדר הגברה של EGFR, הופכת את NCH644 למודל מתאים להבנת התנהגות תאים דמויי גזע של גליובלסטומה, במיוחד בתנאים שונים של גורמי גדילה.

מאפיין בולט נוסף של NCH644 הוא קצב השגשוג האיטי יותר שלו בהשוואה לקווי תאים דמויי גזע אחרים של גליובלסטומה, כגון NCH421k. עם זאת, כאשר הם מגורים על ידי bFGF, תאי NCH644 מראים ביטוי מוגבר של EGFR, גם בהיעדר הגברה של EGFR, מה שמדגיש את האינטראקציה בין קולטני גורם הגדילה של פיברובלסטים (FGFRs) ומסלולי איתות EGFR. יתר על כן, bFGF ממלא תפקיד בהגברת הקלונוגניות והרב-פוטנציאליות של תאי NCH644, מה שתומך עוד יותר ברעיון ש-bFGF חיוני לשמירה על תכונות גזע-דמויות גליומה של תאים אלה.

תאי NCH644 הוכחו גם כמכילים תת-אוכלוסיות השומרות על תווית, בעלות מחזור איטי, המפגינות תאימות מוגברת ועמידות לטיפולים כגון הקרנה וטמוזולומיד. תת-אוכלוסייה זו של תאים השומרים על תווית בתוך קו NCH644 היא בעלת יכולת גידולי גבוהה, ומסוגלת ליצור גידולים בעכברים עם מערכת חיסונית מוחלשת, אפילו עם מספר תאים קטן. תכונות אלה, בשילוב עם עמידותן לטיפולים סטנדרטיים, הופכות את NCH644 לכלי חיוני לחקר אסטרטגיות טיפוליות המכוונות לתאי גזע גליובלסטומה.

Tissue
מוח
Disease
גליובלסטומה

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Biosafety level
1

03Characteristics

Tumourigenic
כן
Ploidy status
אנאופלואידי

04Identifiers

Citation
NCH644 (מספר קטלוגי Cytion 300124)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_x914

05Expression and susceptibility

Antigen expression
חיובי CD133 גבוה

06Handling and culture

Culture medium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 g/L גלוקוז, w: 2.5 mM L-גלוטמין, w: 15 mM HEPES, w: 0.5 mM נתרן פירובט, w: 1.2 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי Cytion 820400a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
יש להוסיף למדיום 5 מ"ג/ל' הפרין, 20 ננוגרם/מ"ל bFGF, 20 מיקרוגרם/ל' EGF, 5 מ"ג/ליטר אינסולין, 100 מ"ג/ליטר טרנספרין, 5.2 מיקרוגרם/ליטר נתרן-סלניט, 6.3 מיקרוגרם/ליטר פרוגסטרון, 161.1 מיקרוגרם/ליטר פוטrescין, 50 מ"ג/ליטר הידרוקורטיזון
Subculturing
לצורך תרבית משנה של תרבויות כדוריות, יש להתחיל בפירוק מכני של הכדוריות באמצעות פיפטה Eppendorf עם קצות מסנן של 1000 μl, על ידי שאיבה כלפי מעלה ומטה 5 עד 10 פעמים. לאחר מכן, יש לסובב את התערובת בצנטריפוגה ב-300g למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר כדי להפריד את התאים. יש לשפוך את הנוזל העליון ולהחזיר את תאי התרבות למדיום תרבית טרי. לבסוף, העבירו את התאים המושעים מחדש לכלי תרבית חדשים כדי לקדם היווצרות נוספת של ספרואידים. גישה זו מבטיחה פירוק יעיל של הספרואידים ומכינה אותם להמשך צמיחה בסביבה חדשה
Seeding density
2 x 105 תאים/מ"ל
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Post-thaw recovery
לאחר ההפשרה, יש לאפשר לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה למשך 24 עד 48 שעות לפחות.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים ב-50% מדיום בסיסי + 40% FBS + 10% DMSO, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקירור.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
66 שנים
Ethnicity
קווקזי