Preskoči na vsebino
Celice NCH644
Tkivo
Možgani
Bolezen
Glioblastom

Dokumenti

Celice NCH644

Cell line · Številka izdelka 300124

Celična linija NCH644 je celična linija, podobna glioblastomskim matičnim celicam, pridobljena iz tumorjev bolnikov, pri katerih ni amplifikacije EGFR, zaradi česar predstavlja dragocen model za preučevanje...

€800.00brez davka in stroškov poštnine
Po naročilu
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
  • CoA
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija NCH644 je glioblastomu podobna matična celična linija, pridobljena iz tumorjev bolnikov, ki nimajo pomnožitve EGFR, zato je dragocen model za preučevanje biologije glioblastoma, zlasti glede signalizacije rastnih dejavnikov in lastnosti matičnih celic. Študije so pokazale, da ima v celicah NCH644 osnovni fibroblastni rastni dejavnik (bFGF) pomembno vlogo pri posredovanju rasti in ohranjanju lastnosti matičnih celic, medtem ko epidermalni rastni dejavnik (EGF) nima podobnih učinkov. Celice NCH644 se na bFGF odzivajo s povečanim izražanjem označevalcev matičnih celic, kot sta CD133 in nestin, in kažejo tudi večjo odpornost proti apoptozi. Zaradi te odpornosti in odsotnosti pomnožitve EGFR je NCH644 primeren model za razumevanje obnašanja matičnih celic glioblastoma, zlasti pod različnimi pogoji rastnih dejavnikov.

Druga pomembna značilnost NCH644 je njena počasnejša proliferacija v primerjavi z drugimi glioblastomskim matičnim celicam podobnimi linijami, kot je NCH421k. Vendar pa celice NCH644 ob stimulaciji z bFGF kažejo povečano izražanje EGFR, tudi če ni amplifikacije EGFR, kar poudarja interakcijo med receptorji za fibroblastni rastni faktor (FGFR) in signalnimi potmi EGFR. Poleg tega ima bFGF vlogo pri povečanju klonogenosti in multipotentnosti celic NCH644, kar dodatno potrjuje domnevo, da je bFGF ključnega pomena za ohranjanje gliomskih matičnih lastnosti teh celic.

Pokazalo se je tudi, da celice NCH644 vsebujejo subpopulacije, ki zadržujejo oznake in se počasi ciklično spreminjajo, kar kaže na povečano tumorigenihnost in odpornost na zdravljenje, kot sta obsevanje in temozolomid. Ta subpopulacija celic, ki ohranjajo oznako, v liniji NCH644 je zelo tumorigena in lahko tvori tumorje v imunsko oslabljenih miših tudi pri majhnem številu celic. Zaradi teh lastnosti in odpornosti na standardna zdravljenja je linija NCH644 ključno orodje za raziskovanje terapevtskih strategij, usmerjenih na matične celice glioblastoma.

Tkivo
Možgani
Bolezen
Glioblastom

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Ženska
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Tumorigeničen
Da
Ploidnost
Aneuploidni

04Identifikatorji

Navajanje vira
NCH644 (kataloška številka Cytion 300124)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_x914

05Izražanje in dovzetnost

Ekspresija antigena
Visoko CD133 pozitiven

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glukoze, w: 2,5 mM L-glutamina, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM natrijevega piruvata, w: 1,2 g/L NaHCO3 (številka izdelka Cytion 820400a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojilnemu mediju dodajte 5 mg/L heparina, 20 ng/mL bFGF, 20 mikrogramov/L EGF, 5 mg/L insulina, 100 mg/L transferina, 5,2 mikrograma/L natrijevega selenita, 6,3 mikrograma/L progesterona, 161,1 mikrograma/L putrescina in 50 mg/L hidrokortizona
Preusmeritev v drugo kulturo
Pri subkultiviranju sferoidnih kultur začnite z mehansko disociacijo sferoidov s pipetiranjem gor in dol 5 do 10-krat z uporabo Eppendorfove pipete s 1000 μl filtrirnimi konicami. Nato mešanico centrifugirajte pri 300 g 5 minut pri sobni temperaturi, da se celice izločijo. Zavrzite supernatant in ponovno suspendirajte celično peleto v svežem gojišču. Resuspendirane celice prenesite v nove posode za gojenje, da spodbudite nadaljnjo tvorbo sferoidov. Ta pristop zagotavlja učinkovito razgradnjo sferoidov in jih pripravi za nadaljnjo rast v novem okolju
Gostota setve
2 x 105 celic/ml
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Obnova po odtaljevanju
Po odmrznitvi pustite celice, da si opomorejo od postopka zamrzovanja vsaj 24 do 48 ur.
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo 50 % osnovno gojišče + 40 % FBS + 10 % DMSO ali CM-1 (kataloška številka Cytion 800100), ki vsebuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, ki ga povzroča krio.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
66 let
Etnična pripadnost
Kavkaški