Ga naar de inhoud
NCH644 Cellen
Weefsel
Hersenen
Ziekte
Glioblastoom

Documenten

NCH644 Cellen

Cell line · Productnummer 300124

De NCH644-cellijn is een glioblastoom-stamcelachtige cellijn die is afgeleid van tumoren van patiënten zonder EGFR-amplificatie, waardoor deze een waardevol model vormt voor onderzoek naar...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op bestelling gemaakt
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De NCH644 cellijn is een glioblastoma stam-achtige cellijn afgeleid van patiëntentumoren zonder EGFR amplificatie, waardoor het een waardevol model is voor het bestuderen van glioblastoma biologie, vooral in de context van groeifactor signalering en stamcellen eigenschappen. Studies hebben aangetoond dat in NCH644 cellen, basis fibroblast groeifactor (bFGF) een belangrijke rol speelt in het mediëren van groei en het handhaven van stamcel eigenschappen, terwijl epidermale groeifactor (EGF) geen vergelijkbare effecten vertoont. NCH644 cellen reageren op bFGF door de expressie van stamcelmarkers zoals CD133 en nestine te verhogen, en ze vertonen ook een verhoogde weerstand tegen apoptose. Deze resistentie, gekoppeld aan het ontbreken van EGFR-amplificatie, maakt NCH644 een geschikt model voor het begrijpen van glioblastoma stamcelgedrag, met name onder verschillende groeifactorcondities.

Een ander opvallend kenmerk van NCH644 is de lagere proliferatiesnelheid vergeleken met andere glioblastoma stamcel-achtige cellijnen, zoals NCH421k. Wanneer NCH644 cellen echter gestimuleerd worden door bFGF, vertonen ze een verhoogde expressie van EGFR, zelfs zonder EGFR-amplificatie, wat de interactie tussen fibroblast-groeifactorreceptoren (FGFR's) en EGFR-signaleringsroutes benadrukt. Bovendien speelt bFGF een rol in het verhogen van de klonogeniciteit en multipotentie van NCH644 cellen, wat het idee verder ondersteunt dat bFGF cruciaal is voor het behoud van de glioma stam-achtige eigenschappen van deze cellen.

Er is ook aangetoond dat NCH644 cellen labelbehoudende, traagcyclerende subpopulaties bevatten die een verhoogde tumorigeniciteit vertonen en resistent zijn tegen behandelingen zoals bestraling en temozolomide. Deze subpopulatie van label-behoudende cellen binnen de NCH644-lijn is zeer tumorigenic, in staat om tumoren te vormen in immuungecompromitteerde muizen, zelfs met kleine aantallen cellen. Deze eigenschappen, gecombineerd met hun resistentie tegen standaardbehandelingen, maken NCH644 tot een cruciaal instrument voor het onderzoeken van therapeutische strategieën gericht op glioblastoma-stamcellen.

Weefsel
Hersenen
Ziekte
Glioblastoom

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Tumorverwekkend
Ja
Ploïdie
Aneuploïde

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
NCH644 (Cytion catalogusnummer 300124)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_x914

05Expressie en vatbaarheid

Antigeenexpressie
Zeer CD133 positief

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Voeg aan het medium 5 mg/L heparine, 20 ng/mL bFGF, 20 microgram/L EGF, 5 mg/L insuline, 100 mg/L transferrine, 5,2 microgram/L natriumseleniet, 6,3 microgram/L progesteron, 161,1 microgram/L putrescine, 50 mg/L hydrocortison
Heruitplanten
Voor subcultuur sferoïde culturen, beginnen met het mechanisch scheiden van de sferoïden door pipetteren op en neer 5 tot 10 keer met behulp van een Eppendorf pipet met 1000 ul filtertips. Hierna centrifugeer je het mengsel bij 300g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur om de cellen te pelleteren. Gooi het supernatant weg en resuspendeer de celpellet in vers kweekmedium. Breng ten slotte de geresuspendeerde cellen over in nieuwe kweekvaten om verdere sferoïdvorming te bevorderen. Deze aanpak zorgt voor een efficiënte afbraak van de sferoïden en maakt ze klaar voor verdere groei in een nieuwe omgeving
Zaaidichtheid
2 x 105 cellen/ml
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Laat de cellen na het ontdooien minstens 24 tot 48 uur bijkomen van het vriesproces.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we 50% basaal medium + 40% FBS + 10% DMSO, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en cryogeïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
66 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch