Skip to content
เซลล์ NCH644
Tissue
สมอง
Disease
กลิโอบลาสโตมา

Documents

เซลล์ NCH644

Cell line · Product number 300124

The NCH644 cell line is a glioblastoma stem-like cell line derived from patient tumors that lack EGFR amplification, making it a valuable model for studyi...

€800.00excl. tax and shipping
Made to order
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

สายเซลล์ NCH644 เป็นสายเซลล์ชนิดคล้ายเซลล์ต้นกำเนิดของเนื้องอกสมองชนิดกลิโอบลาสโตมาที่ได้มาจากเนื้องอกของผู้ป่วยซึ่งไม่มีการเพิ่มจำนวนของยีน EGFR ทำให้เป็นแบบจำลองที่มีคุณค่าสำหรับการศึกษาชีววิทยาของเนื้องอกสมองชนิดกลิโอบลาสโตมา โดยเฉพาะในบริบทของการส่งสัญญาณของปัจจัยการเจริญเติบโตและคุณสมบัติของเซลล์ต้นกำเนิดการศึกษาได้แสดงให้เห็นว่า ในเซลล์ NCH644 ปัจจัยการเจริญเติบโตของไฟโบรบลาสต์พื้นฐาน (bFGF) มีบทบาทสำคัญในการควบคุมการเจริญเติบโตและรักษาลักษณะของเซลล์ต้นกำเนิด ในขณะที่ปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนัง (EGF) ไม่แสดงผลที่คล้ายกันเซลล์ NCH644 ตอบสนองต่อ bFGF โดยการเพิ่มการแสดงออกของตัวบ่งชี้เซลล์ต้นกำเนิด เช่น CD133 และ nestin และยังมีคุณสมบัติต้านทานต่อการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสเพิ่มขึ้นอีกด้วย ความต้านทานนี้ ประกอบกับการขาดการเพิ่มจำนวนของ EGFR ทำให้ NCH644 เป็นแบบจำลองที่เหมาะสมสำหรับการทำความเข้าใจพฤติกรรมของเซลล์คล้ายเซลล์ต้นกำเนิดในเนื้องอกสมองชนิดกลิโอบลาสโตมา โดยเฉพาะภายใต้สภาวะของปัจจัยการเจริญเติบโตที่แตกต่างกัน

อีกหนึ่งคุณสมบัติที่โดดเด่นของ NCH644 คืออัตราการเพิ่มจำนวนที่ช้ากว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ไลน์ชนิดคล้ายเซลล์ต้นกำเนิดของกลีโอบลาสโตมาชนิดอื่น ๆ เช่น NCH421k อย่างไรก็ตาม เมื่อถูกกระตุ้นด้วย bFGF เซลล์ NCH644 จะแสดงการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของ EGFR แม้ว่าจะไม่มีการเพิ่มจำนวนของ EGFR ซึ่งเน้นย้ำถึงปฏิสัมพันธ์ระหว่างตัวรับไฟโบรบลาสต์โกรทแฟคเตอร์ (FGFRs) และเส้นทางสัญญาณของ EGFRนอกจากนี้ bFGF ยังมีบทบาทในการเพิ่มความสามารถในการสร้างโคลนและความหลากหลายของเซลล์ NCH644 ซึ่งสนับสนุนแนวคิดที่ว่า bFGF มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการคงคุณสมบัติคล้ายเซลล์ต้นกำเนิดของเซลล์เนื้องอกในสมองชนิดกลิโอบาในเซลล์เหล่านี้

เซลล์ NCH644 ยังแสดงให้เห็นว่ามีประชากรย่อยที่ยังคงรักษาฉลากและมีการแบ่งตัวช้า ซึ่งแสดงความสามารถในการก่อเนื้องอกที่เพิ่มขึ้นและความต้านทานต่อการรักษา เช่น การฉายรังสีและเทโมโซโลไมด์กลุ่มย่อยของเซลล์ที่ยังคงมีฉลากอยู่ภายในสายพันธุ์ NCH644 นี้มีความสามารถในการก่อให้เกิดเนื้องอกสูง สามารถสร้างเนื้องอกในหนูที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่องได้แม้จะมีจำนวนเซลล์เพียงเล็กน้อย คุณลักษณะเหล่านี้เมื่อรวมกับความต้านทานต่อการรักษาแบบมาตรฐาน ทำให้ NCH644 เป็นเครื่องมือสำคัญสำหรับการศึกษาวิธีการรักษาที่มุ่งเป้าไปที่เซลล์ต้นกำเนิดของเนื้องอกในสมองชนิดกลิโอบลาสโตมา

Tissue
สมอง
Disease
กลิโอบลาสโตมา

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Biosafety level
1

03Characteristics

Tumourigenic
ใช่
Ploidy status
อะนีพลอยด์

04Identifiers

Citation
NCH644 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 300124)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_x914

05Expression and susceptibility

Antigen expression
มีค่า CD133 เป็นบวกสูง

06Handling and culture

Culture medium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: 2.5 มิลลิโมลาร์ L-กลูตามีน, w: 15 มิลลิโมลาร์ HEPES, w: 0.5 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต, w: 1.2 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820400a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมสารเสริมลงในสื่อเพาะเลี้ยง ได้แก่ เฮปาริน 5 มก./ลิตร, bFGF 20 นาโนกรัม/มิลลิลิตร, EGF 20 ไมโครกรัม/ลิตร, 5 mg/L อินซูลิน, 100 mg/L ทรานสเฟอร์ริน, 5.2 ไมโครกรัม/L Na-selenit, 6.3 ไมโครกรัม/L โปรเจสเตอโรน, 161.1 ไมโครกรัม/L พูเทรสซิน, 50 mg/L ไฮโดรคอร์ติโซน
Subculturing
สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ทรงกลมแบบย่อย ให้เริ่มต้นด้วยการแยกเซลล์ออกจากกันทางกลไกโดยการดูดและปล่อยของเหลวขึ้นลง 5 ถึง 10 ครั้ง โดยใช้ปิเปต Eppendorf พร้อมปลายกรองขนาด 1000 μl หลังจากนั้น นำส่วนผสมไปปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว 300g เป็นเวลา 5 นาที ที่อุณหภูมิห้อง เพื่อให้เซลล์ตกตะกอน กำจัดส่วนใสที่ลอยอยู่ด้านบนทิ้ง แล้วนำไปแขวนลอยเซลล์ที่ตกตะกอนในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่สุดท้าย ให้ถ่ายโอนเซลล์ที่แขวนลอยกลับเข้าไปในภาชนะเพาะเลี้ยงใหม่เพื่อส่งเสริมการก่อตัวของก้อนเซลล์ทรงกลมต่อไป วิธีการนี้ช่วยให้การสลายตัวของก้อนเซลล์ทรงกลมมีประสิทธิภาพและเตรียมพร้อมสำหรับการเจริญเติบโตต่อไปในสภาพแวดล้อมใหม่
Seeding density
2 x 10⁵ เซลล์/มิลลิลิตร
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Post-thaw recovery
หลังจากละลายน้ำแข็งแล้ว ให้เซลล์ฟื้นตัวจากกระบวนการแช่แข็งเป็นเวลาอย่างน้อย 24 ถึง 48 ชั่วโมง
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้ 50% basal medium + 40% FBS + 10% DMSO หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Donor age
66 ปี
Ethnicity
คอเคเชียน