Mine otse sisu juurde
NCH644 rakud
Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom

Dokumendid

NCH644 rakud

Cell line · Toote number 300124

NCH644 rakuliin on glioblastoomi tüvirakkudele sarnane rakuliin, mis on saadud patsientide kasvajatest, milles puudub EGFR-i amplifikatsioon, mistõttu on see väärtuslik mudel uurimiseks...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

NCH644 rakuliin on glioblastoomi tüveline rakuliin, mis on saadud patsientide kasvajatest, millel puudub EGFR-i amplifikatsioon, mistõttu on see väärtuslik mudel glioblastoomi bioloogia uurimiseks, eriti kasvufaktorite signalisatsiooni ja tüvirakkude omaduste kontekstis. Uuringud on näidanud, et NCH644 rakkudes mängib põhiline fibroblastide kasvufaktor (bFGF) olulist rolli kasvu vahendamisel ja tüvirakkude omaduste säilitamisel, samas kui epidermise kasvufaktor (EGF) ei avalda samasugust mõju. NCH644 rakud reageerivad bFGF-le, suurendades tüvirakkude markerite, nagu CD133 ja nestin, ekspressiooni, ning neil on ka suurem vastupanu apoptoosile. See resistentsus koos EGFR-i amplifikatsiooni puudumisega teeb NCH644 sobilikuks mudeliks glioblastoomi tüvirakkude käitumise mõistmiseks, eriti erinevate kasvufaktorite tingimustes.

NCH644 teine tähelepanuväärne omadus on tema aeglasem proliferatsioonikiirus võrreldes teiste glioblastoomi tüvirakuliinidega, näiteks NCH421k. Kui NCH644 rakke stimuleeritakse bFGF-ga, on EGFR-i ekspressioon suurenenud isegi EGFR-i amplifikatsiooni puudumisel, mis rõhutab fibroblastide kasvufaktori retseptorite (FGFR-i) ja EGFR-i signaaliradade vastastikmõju. Lisaks mängib bFGF rolli NCH644 rakkude klonogeensuse ja multipotentsuse suurendamisel, mis toetab veelgi arusaama, et bFGF on oluline nende rakkude glioomi tüveliste omaduste säilitamisel.

Samuti on näidatud, et NCH644 rakud sisaldavad märgistust säilitavaid, aeglase tsükliga alampopulatsioone, millel on suurenenud kasvajalisus ja resistentsus selliste ravimeetodite nagu kiiritus ja temozolomiid suhtes. See NCH644 liini märgistust säilitavate rakkude alampopulatsioon on väga tumorigeenne, olles võimeline moodustama immuunpuudulikkusega hiirtel kasvajaid isegi väikese rakkude arvu korral. Need omadused koos nende resistentsusega standardsete ravimeetodite suhtes teevad NCH644 kriitiliseks vahendiks glioblastoomi tüvirakkudele suunatud ravistrateegiate uurimisel.

Kude
Aju
Haigus
Glioblastoom

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Tuumorigeenne
Jah
Ploidsus
Aneuploidne

04Tunnused

Viide
NCH644 (Cytioni katalooginumber 300124)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_x914

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Antigeeni ekspressioon
Väga CD133-positiivne

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Lisage kasvukeskkonnale 5 mg/l hepariini, 20 ng/ml bFGF-i, 20 mikrogrammi/l EGF-i, 5 mg/l insuliini, 100 mg/l transferriini, 5,2 mikrogrammi/l na-seleniiti, 6,3 mikrogrammi/l progesterooni, 161,1 mikrogrammi/l putreskiini, 50 mg/l hüdrokortisooni
Kultuuri edasikasvatamine
Sferoidikultuuride subkultuurimiseks alustage sferoidide mehaanilise dissotsiatsiooniga, kasutades Eppendorfi pipetti, millel on 1000 μl filtriotsikud, 5-10 korda üles-alla pipetiga. Pärast seda tsentrifuugige segu 300 g juures 5 minutit toatemperatuuril, et rakud pelleteerida. Visake supernatant ära ja resuspenseerige rakupellet värskes kultuurkeskkonnas. Lõpuks kandke resuspendeeritud rakud uutesse kasvatusanumatesse, et soodustada edasist sferoidide moodustumist. Selline lähenemine tagab sferoidide tõhusa lagunemise ja valmistab neid ette jätkuvaks kasvuks uues keskkonnas
Külvitihedus
2 x 105 rakku/ml
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist laske rakkudel vähemalt 24-48 tundi külmutamisest taastuda.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüokonserveerimissöötmena kasutame 50% põhikeskkonda + 40% FBS + 10% DMSO ehk CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüoostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
66 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia