Células NCH644

A linhagem celular NCH644 é uma linhagem de células semelhantes às células-tronco do glioblastoma, derivada de tumores de pacientes que não apresentam amplificação do EGFR, o que a torna um modelo valioso para o estudo da biologia do glioblastoma, especialmente no contexto da sinalização de fatores de crescimento e das propriedades das células-tronco. Estudos demonstraram que, nas células NCH644, o fator de crescimento fibroblástico básico (bFGF) desempenha um papel significativo na mediação do crescimento e na manutenção das características das células-tronco, enquanto o fator de crescimento epidérmico (EGF) não apresenta efeitos semelhantes. As células NCH644 respondem ao bFGF aumentando a expressão de marcadores de células-tronco, como CD133 e nestina, e também apresentam maior resistência à apoptose. Essa resistência, aliada à ausência de amplificação do EGFR, torna a NCH644 um modelo adequado para compreender o comportamento das células semelhantes às células-tronco do glioblastoma, particularmente sob diferentes condições de fatores de crescimento.

Outra característica notável da NCH644 é sua taxa de proliferação mais lenta quando comparada a outras linhagens de células semelhantes às células-tronco do glioblastoma, como a NCH421k. No entanto, quando estimuladas pelo bFGF, as células NCH644 apresentam aumento na expressão do EGFR, mesmo na ausência de amplificação do EGFR, o que destaca a interação entre os receptores do fator de crescimento fibroblástico (FGFRs) e as vias de sinalização do EGFR. Além disso, o bFGF desempenha um papel no aumento da clonogenicidade e da multipotência das células NCH644, reforçando ainda mais a noção de que o bFGF é crucial para a manutenção das propriedades semelhantes às células-tronco de glioma dessas células.

Também foi demonstrado que as células NCH644 abrigam subpopulações que retêm o marcador e apresentam ciclo celular lento, as quais exibem maior tumorigenicidade e resistência a tratamentos como irradiação e temozolomida. Essa subpopulação de células que retêm o marcador na linhagem NCH644 é altamente tumorigênica, capaz de formar tumores em camundongos imunocomprometidos mesmo com um número reduzido de células. Essas características, combinadas com sua resistência a tratamentos padrão, tornam a linhagem NCH644 uma ferramenta essencial para a investigação de estratégias terapêuticas direcionadas às células-tronco do glioblastoma.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.