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HEK293-GPRC5D
Gewebe
Fötale Niere
Krankheit
Transformiert/immunisiert; nicht tumorogen (HEK293-Hintergrund)

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HEK293-GPRC5D

Cell line · Artikelnummer 305989

Haftungsausschluss: Die für Zelllinien angegebenen Preise gelten ausschließlich für Kunden aus dem akademischen Bereich bzw. gemeinnützige Einrichtungen. Für gewerbliche Unternehmen gelten die Preise...

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Auftragsfertigung
1

01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Haftungsausschluss: Die für Zelllinien angegebenen Preise gelten ausschließlich für akademische/gemeinnützige Kunden. Für kommerzielle Einrichtungen beträgt der Preis ca. 6.250 €.
Wenn Sie eine kommerzielle Einrichtung vertreten oder sich nicht sicher sind, welche Kategorie auf Sie zutrifft, wenden Sie sich bitte an uns.


HEK293-GPRC5D-Zellen sind menschliche embryonale Nierenzellen 293 (HEK293), die so verändert wurden, dass sie stabil das menschliche G-Protein-gekoppelte Rezeptor-Familie-C-Gruppe-5-Mitglied D (GPRC5D) exprimieren, einen Orphan-Rezeptor, der zur Klasse C der G-Protein-gekoppelten Rezeptorfamilie gehört. GPRC5D zeigt eine stark eingeschränkte Expression in normalem Gewebe, wobei eine vorherrschende Expression in Haarfollikeln, keratinisiertem Gewebe und Plasmazellen berichtet wird. Wichtig ist, dass der Rezeptor bei multiplem Myelom und bestimmten anderen Plasmazell-Malignomen stark exprimiert wird, wo seine begrenzte Verteilung in normalem Gewebe und seine robuste tumorassoziierte Expression ihn zu einem prominenten Ziel für die Entwicklung von Immuntherapien gemacht haben, insbesondere bei Patienten, die nach BCMA-gerichteten Therapien einen Rückfall erleiden.

HEK293-GPRC5D-Zellen finden in der hämatologischen Onkologieforschung und der therapeutischen Entwicklung breite Anwendung zur Charakterisierung von GPRC5D-gerichteten monoklonalen Antikörpern, bispezifischen T-Zell-Engagern, Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten sowie CAR-T- oder CAR-NK-Zelltherapien. Das stabile rekombinante Expressionssystem ermöglicht die quantitative Bewertung der Antigenbindungsaffinität, der Rezeptorbelegung, der Oberflächenexpressionsdichte, der Epitopspezifität und der zielabhängigen Zytotoxizität. Diese Zellen sind besonders wertvoll für die Bewertung der Aktivität und Selektivität von gentechnisch veränderten Immunzelltherapien und T-Zell-umleitenden Biologika, die auf GPRC5D-positive Malignome abzielen. Weitere Anwendungsbereiche umfassen die Entwicklung von Durchflusszytometrie-Assays, Reporter-Assays, Hochdurchsatz-Screening sowie die Validierung von rezeptorspezifischen Bildgebungsmitteln oder diagnostischen Reagenzien.

Gewebe
Fötale Niere
Krankheit
Transformiert/immunisiert; nicht tumorogen (HEK293-Hintergrund)
Anwendungen
Entwicklung von GPRC5D-spezifischen Antikörpern und bispezifischen Antikörpern; Therapeutika für das multiple Myelom; CAR-T-Zelltherapie; ADCC-/CDC-Assays; Durchflusszytometrie; immunonkologisches Screening

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This HEK293 cell line contains a GPRC5D expression construct for multiple myeloma antigen studies and targeted therapy development. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Epithelzellen
Verdopplungszeit
ca. 24–36 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
HEK293-GPRC5D (Cytion-Katalognummer 305989)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_6G25

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
GPRC5D

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10 % FBS, 1 mM Natriumpyruvat, 10 mM HEPES, 1 % NEAA. Geneticin (G418-Sulfat) hinzufügen, um eine Endkonzentration von 1 mg/ml zu erreichen.
Dissoziationsreagenz
Trypsin-EDTA
Subkultivierung
Für die routinemäßige adhärente Zellkultur: Saugen Sie das alte Kulturmedium von den adhärenten Zellen ab und waschen Sie sie mit PBS, um das restliche Medium zu entfernen. Nach dem Absaugen des PBS die entsprechende Menge Trypsin/EDTA-Lösung je nach Größe des Kulturgefäßes zugeben (z. B. 1 ml für einen T25-Kolben, 3 ml für einen T75-Kolben) und bei Raumtemperatur oder 37 °C inkubieren, bis sich die Zellen ablösen (5-10 Minuten). Überwachen Sie die Ablösung unter dem Mikroskop und klopfen Sie bei Bedarf vorsichtig auf das Gefäß, um die Zellen freizusetzen. Sobald sich die Zellen abgelöst haben, fügen Sie vollständiges Medium hinzu, um das Trypsin/EDTA zu inaktivieren, resuspendieren Sie die Zellen vorsichtig und transferieren Sie einen aliquoten Teil der Zellsuspension in ein neues Kulturgefäß mit frischem Medium. Stellen Sie das Gefäß in einen auf 37°C und 5%CO2 eingestellten Inkubator und wechseln Sie das Medium alle 2-3 Tage.
Split-Verhältnis
1 bis 5
Aussaatdichte
2 bis 4 x 104 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen

Nach dem Auftauen die Zellen im Verhältnis 1:2 bis 1:3 in T25-Kolben aufteilen und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und anhaften lassen (bei adhärenten Kulturen).

Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
Fötus