Mine otse sisu juurde
HEK293-GPRC5D
Kude
Loote neerud
Haigus
Muundatud/immortaliseeritud; ei põhjusta kasvajate teket (HEK293-taust)

Dokumendid

HEK293-GPRC5D

Cell line · Toote number 305989

Vastutusest loobumine: Rakuliinide juures näidatud hinnad kehtivad ainult akadeemilistele ja mittetulunduslikele klientidele. Äriühingute puhul on hinnad...

€1,900.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

Vastutuse välistamine: Rakuliinide juures näidatud hinnad kehtivad ainult akadeemilistele ja mittetulunduslikele klientidele. Äriühingute puhul on hind umbes 6250 eurot.
Kui esindate äriühingut või ei ole kindel, milline kategooria teie puhul kehtib, palun võtke meiega ühendust.


HEK293-GPRC5D rakud on inimese embrüonaalsed neeru 293 (HEK293) rakud, mis on geneetiliselt muundatud stabiilselt ekspresseerima inimese G-valgu-seotud retseptorite perekonna C rühma 5 liiget D (GPRC5D), mis on C-klassi G-valgu-seotud retseptorite perekonda kuuluv orvuretseptor. GPRC5D ekspresseerub normaalse kudedes väga piiratult, kusjuures domineeriv ekspressioon on täheldatud karvafolliikulites, keratiniseerunud kudedes ja plasmarakkudes. Oluline on, et retseptor ekspresseerub tugevalt mitmekordse müeloomi ja teatud teiste plasmarakkude pahaloomuliste kasvajate korral, kus selle piiratud jaotus normaalse kudedes ja tugev kasvajaga seotud ekspressioon on muutnud selle silmapaistvaks sihtmärgiks immunoteraapia arendamisel, eriti patsientidel, kellel on esinenud retsidiiv pärast BCMA-suunatud ravimeetodeid.

HEK293-GPRC5D rakke kasutatakse laialdaselt hematoloogilise onkoloogia uurimistöös ja ravimite arendamisel GPRC5D-le suunatud monoklonaalsete antikehade, bispetsiifiliste T-rakkude aktivaatorite, antikeha-ravimkonjugaatide ning CAR-T- või CAR-NK-rakkude ravi iseloomustamiseks. Stabiilne rekombinantne ekspressioonisüsteem võimaldab kvantitatiivselt hinnata antigeeni seondumisaafiinsust, retseptori hõivatust, pinnalise ekspressiooni tihedust, epitoobi spetsiifilisust ja sihtmärgist sõltuvat tsütotoksilisust. Need rakud on eriti väärtuslikud GPRC5D-positiivsetele pahaloomulistele kasvajatele suunatud geneetiliselt muundatud immuunrakkude ravimite ja T-rakkude suunamisel põhinevate bioloogiliste ravimite aktiivsuse ja selektiivsuse hindamisel. Lisarakendused hõlmavad voolutsütomeetria analüüside arendamist, reporteranalüüse, suure läbilaskevõimega sõelumist ning retseptorispetsiifiliste pildistamisainete või diagnostiliste reagentide valideerimist.

Kude
Loote neerud
Haigus
Muundatud/immortaliseeritud; ei põhjusta kasvajate teket (HEK293-taust)
Rakendused
GPRC5D-le suunatud antikeha ja bispetsiifilise antikeha arendamine; hulgimüeloomi ravimid; CAR-T-rakkude ravi; ADCC/CDC-analüüsid; voolutsütomeetria; immunoonkoloogiline sõelumine

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This HEK293 cell line contains a GPRC5D expression construct for multiple myeloma antigen studies and targeted therapy development. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteelirakud
Kahekordistumisaeg
u. 24–36 tundi

04Tunnused

Viide
HEK293-GPRC5D (Cytioni katalooginumber 305989)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_6G25

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Ekspresseeritud retseptorid
GPRC5D

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendage keskkonda 10% FBS-iga, 1 mM naatriumpüruvaadiga, 10 mM HEPES-iga, 1% NEAA-ga. Lisage geneetilistiini (G418-Sulfat), et saavutada lõplik kontsentratsioon 1 mg/ml.
Dissotsiatsioonireaktiiv
Trypsin-EDTA
Kultuuri edasikasvatamine
Rutiinseks adherentseks rakukultuuriks: Aspireerige adhereeruvatelt rakkudelt vana kultuurkeskkond ja peske neid PBS-ga, et eemaldada allesjäänud keskkond. Pärast PBS-i aspiratsiooni lisage sobiv kogus trüpsiini/EDTA lahust vastavalt kasvatusanuma suurusele (nt 1 ml T25 kolvi puhul, 3 ml T75 kolvi puhul) ja inkubeerige toatemperatuuril või 37 °C, kuni rakud eralduvad (5-10 minutit). Jälgige rakkude eraldumist mikroskoobi all ja koputage vajadusel õrnalt anumat, et rakud eralduksid. Kui rakud on eraldunud, lisage trüpsiini/EDTA inaktiveerimiseks täielikku söötmeainet, suspenseerige rakud ettevaatlikult uuesti ja kandke rakususpensiooni alikvoot uude, värsket söötmeainet sisaldavasse kasvatusanumasse. Asetage anum inkubaatorisse, mille temperatuur on 37 °C ja 5%CO2, ning vahetage söötme iga 2-3 päeva tagant.
Jagamissuhe
1–5
Külvitihedus
2 kuni 4 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist

Pärast sulatamist jagage rakud 1:2 kuni 1:3 T25 kolvidesse ja laske rakkudel taastuda külmumisprotsessist ja adhereeruda (adhereeruvate kultuuride puhul) vähemalt 24 tundi.

Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
Loote