Εισαγωγή

Η κυτταρική σειρά MC38 — γνωστή επίσης ως MCA-38, MCA 38, MCA38, MC-38, MC-38 B/6, Mouse Colon 38, Colon 38, Colon-38, Colon38, Murine Carcinoma-38 και C38 (αριθμός καταχώρισης Cellosaurus CVCL_B288) — είναι ένα από τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα μοντέλα ποντικών στην έρευνα για τον καρκίνο του παχέος εντέρου και την ανοσο-ογκολογία. Ο αρχικός όγκος προκλήθηκε με τη χρήση της καρκινογόνου ουσίας 1,2-διμεθυλυδραζίνη (DMH) σε ποντίκια C57BL/6 και περιγράφηκε από τους Corbett και συνεργάτες το 1975 [1]; η κυτταρική σειρά δημιουργήθηκε στη συνέχεια σε καλλιέργεια από τους Tan, Holyoke και Goldrosen το 1976 [2]. Η συγγενική συμβατότητά τους με ποντίκια C57BL/6, το υψηλό μεταλλακτικό φορτίο και η ανταπόκρισή τους στους αναστολείς των ανοσολογικών σημείων ελέγχου έχουν καταστήσει τα κύτταρα MC38 ένα απαραίτητο εργαλείο για τη μελέτη των νεοπλασμάτων του παχέος εντέρου, των εμβολίων κατά του καρκίνου, τις αποκρίσεις των CD8-θετικών Τ-λεμφοκυττάρων, τα μακροφάγα που σχετίζονται με τον όγκο και τη βιολογία της οδού του υποδοχέα προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου 1 (PD-1). Το μοντέλο αυτό συνεχίζει να αποτελεί τη βάση για τις εξελίξεις στην ανοσοθεραπεία του καρκίνου, τη γονιδιακή θεραπεία και την ανακάλυψη νεοαντιγόνων.

Κύρια συμπεράσματα

• Η MC38 είναι μια κυτταρική σειρά αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου ποντικού, συγγενής με το στέλεχος ποντικού C57BL/6, η οποία προέρχεται από όγκο που προκλήθηκε από DMH.
• Η κυτταρική σειρά φέρει υψηλό μεταλλακτικό φορτίο και εκφράζει νεοαντιγόνα που αναγνωρίζονται από τα CD8-θετικά Τ-λεμφοκύτταρα — ωστόσο, η παρουσία συγκεκριμένων νεοαντιγόνων εξαρτάται από την υποσειρά (βλ. παρακάτω).
• Το MC38 είναι ευαίσθητο στους αναστολείς των ανοσολογικών σημείων ελέγχου, γεγονός που το καθιστά ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο μοντέλο για την έρευνα σχετικά με την οδό PD-1/PD-L1.
• Το μοντέλο έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στην ανάπτυξη εμβολίων κατά του καρκίνου, στη γονιδιακή θεραπεία με κυτοκίνες και σε μελέτες ανοσολογίας των όγκων.
• Υπάρχουν σημαντικές διαφορές στο γονιδίωμα και στο μεταγραφόμενο μεταξύ των υπογραμμών MC38 από διαφορετικές τράπεζες. Τα γνωστά νεοεπιτόπια Rpl18 και Adpgk υπάρχουν στην υπογραμμή του Λέιντεν (MC38-L), αλλά απουσιάζουν από την υπογραμμή Kerafast/NCI (MC38-K), η οποία, ως εκ τούτου, δεν αναγνωρίζεται από τα αντίστοιχα Τ κύτταρα. Η προσεκτική επιλογή της πηγής και η τεκμηρίωση της προέλευσης είναι ουσιαστικής σημασίας. [3]
• Διατίθενται πολυάριθμες γενετικά τροποποιημένες σειρές (knockout, reporter, υπερέκφρασης), οι οποίες διευρύνουν την πειραματική ευελιξία του μοντέλου.

Τι είναι το MC38;

Η MC38 είναι μια μεταμοσχεύσιμη κυτταρική σειρά αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου ποντικού, η οποία ταξινομείται ως καρκινική κυτταρική σειρά στη βάση δεδομένων Cellosaurus (CVCL_B288). Η σειρά προήλθε από θηλυκό ποντίκι C57BL/6 άγνωστης ηλικίας που έφερε αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου (αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου ποντικού, NCIt C120044). Οι Corbett και συνεργάτες προκάλεσαν 82 όγκους του παχέος εντέρου σε τέσσερα στελέχη ποντικών ομόζυγων γενεών, στο πλαίσιο μιας συστηματικής προσπάθειας για τη δημιουργία μεταμοσχεύσιμων μοντέλων όγκων του παχέος εντέρου για δοκιμές χημειοθεραπείας· τέσσερις όγκοι επέζησαν της πρώτης μεταμόσχευσης και εισήλθαν σε σειριακή πάροδο [1]. Στη συνέχεια, οι Tan, Holyoke και Goldrosen περιέγραψαν μεθόδους για την επιλεκτική καλλιέργεια της σειράς MCA-38 in vitro, επισημαίνοντας ότι τα ινοβλαστοειδή στοιχεία μπορούσαν να απομακρυνθούν με επεξεργασία με τρυψίνη, ώστε να προκύψει ένας σταθερός επιθηλιακός πληθυσμός [2]. Το Cellosaurus αναφέρει χρόνο διπλασιασμού 24,3 ωρών για το MC38 [4], και η σειρά καλλιεργείται ως προσκολλητική καλλιέργεια. Ο χαρακτηρισμός μέσω ομικών μεθόδων περιελάμβανε αλληλούχιση ολόκληρου του εξονίου, μεταγραφωμική ανάλυση με μικροσυστοιχίες και RNA-seq, πρωτεωμική ανάλυση του πεπτιδομίου της MHC κλάσης Ι, ανάλυση συστοιχιών SNP και αλληλούχιση του μιτοχονδριακού γονιδιώματος. (Το Cellosaurus καταχωρίζει την καταχώριση του πεπτιδομίου υπό τη γενική ονομασία «πεπτιδόμιο HLA κλάσης Ι»· τα ποντικά κύτταρα παρουσιάζουν πεπτίδια σε μόρια H-2, όχι HLA.)

Πληροφορίες για την καλλιέργεια κυττάρων MC38

Σημείωση σχετικά με τις ειδικές συνθήκες για κάθε υπογραμμή: το παραπάνω μέσο αντιστοιχεί στις συνθήκες καλλιέργειας που έχουν αναφερθεί για την υπογραμμή που προέρχεται από Kerafast/NCI (MC38-K). Η υπογραμμή Leiden (MC38-L) καλλιεργείται σε IMDM με 8% FBS, 2 mM L-γλουταμίνη και 50 µM 2-μερκαπτοαιθανόλη [3]. Οι χρήστες πρέπει να τηρούν τους όρους που ορίζει ο πάροχός τους.

Πλεονεκτήματα των κυττάρων MC38

Ένα από τα βασικά πλεονεκτήματα του Κύτταρα MC38 είναι η συγγενική συμβατότητά τους με το ευρέως διαθέσιμο στέλεχος ποντικών C57BL/6. Αυτή η συμβατότητα επιτρέπει στους ερευνητές να μελετούν τις αλληλεπιδράσεις μεταξύ όγκου και ανοσοποιητικού συστήματος σε έναν πλήρως ανοσοϊκανό ξενιστή, αποφεύγοντας τις παραμορφώσεις που προκαλεί η ανοσοανεπάρκεια και οι οποίες περιορίζουν τη μεταφραστική αξία των μοντέλων ξενομοσχεύματος. Το άθικτο ανοσοποιητικό σύστημα επιτρέπει την αυστηρή αξιολόγηση των αποκρίσεων των CD8-θετικών Τ-λεμφοκυττάρων, της βιολογίας των μακροφάγων που σχετίζονται με τον όγκο, της δραστηριότητας των φυσικών κυττάρων-δολοφόνων (natural killer cells) και του πλήρους φάσματος της προσαρμοστικής και της έμφυτης αντικαρκινικής ανοσίας.

Επειδή ο γονικός όγκος προκλήθηκε χημικά με DMH, το MC38 παρουσιάζει υψηλό φορτίο μεταλλάξεων του όγκου και εκφράζει ανοσογόνα νεοαντιγόνα, τα οποία χαρακτηρίστηκαν μέσω αλληλούχισης ολόκληρου του εξώματος και ανάλυσης του πεπτιδομίου MHC τάξης Ι [5]. Αυτό το περιβάλλον πλούσιο σε νεοαντιγόνα καθιστά το μοντέλο ευαίσθητο στους αναστολείς των ανοσολογικών σημείων ελέγχου που στοχεύουν στην οδό του υποδοχέα προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου 1 [3], γεγονός που αποτελεί έναν από τους λόγους για τους οποίους χρησιμοποιείται συχνά ως ανάλογο της υποομάδας των ανθρώπινων καρκίνων του παχέος εντέρου με υπερμετάλλαξη, οι οποίοι ανταποκρίνονται σε τέτοιου είδους θεραπείες. Η ανταπόκριση της κυτταρικής σειράς στην ανοσοθεραπεία την έχει καταστήσει ένα από τα τυπικά προκλινικά εργαλεία για την αξιολόγηση νέων συνδυασμών αναστολέων ανοσολογικών σημείων ελέγχου και εμβολίων κατά του καρκίνου. Σημειώνεται ότι τα συγκεκριμένα νεοαντιγόνα που υπάρχουν εξαρτώνται από την υποσειρά που χρησιμοποιείται [3].

Ένα εκτεταμένο οικοσύστημα γενετικά τροποποιημένων παραγώγων σειρών MC38 διευρύνει περαιτέρω τη χρησιμότητα του μοντέλου. Γραμμές με απενεργοποίηση γονιδίων που στοχεύουν σε ρυθμιστές του ανοσοποιητικού συστήματος, όπως τα PD-L1 (Cd274), B2m και CD47, καθώς και γραμμές-δείκτες που εκφράζουν λουσιφεράση ή φθορίζουσες πρωτεΐνες, καταχωρίζονται στο Cellosaurus ως παράγωγα της CVCL_B288 και παρέχουν έτοιμα εργαλεία για μελέτες μηχανισμών και απεικόνισης in vivo. Χρόνος διπλασιασμού περίπου 24 ωρών [4] υποστηρίζει την αποτελεσματική διεξαγωγή πειραμάτων, καθώς και τη δυνατότητα γενετικής τροποποίησης της κυτταρικής σειράς — μέσω ληντοϊού [12], ρετροϊός [10], και η ηλεκτροπόρωση [3] — έχει αποδειχθεί σε πολλές δημοσιευμένες μελέτες.

Περιορισμοί των κυττάρων MC38

Ένας κρίσιμος περιορισμός του μοντέλου MC38 είναι η τεκμηριωμένη ετερογένεια μεταξύ υπογραμμών διαφορετικής προέλευσης. Μια μελέτη του 2023 από τους Schrörs και συνεργάτες πραγματοποίησε συγκριτική αλληλούχιση εξωμίου και μεταγραφώματος κυττάρων MC38 από την Kerafast (προέλευσης NCI/NIH, MC38-K) και από τη συλλογή του Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου του Λέιντεν (MC38-L), και διαπίστωσε σημαντικές διαφορές στα προφίλ μεταλλάξεων, στην πλοειδία και στην έκφραση νεοαντιγόνων [3]. Το MC38-L περιείχε περίπου 1,3 φορές περισσότερες παραλλαγές ενός νουκλεοτιδίου και μικρές προσθήκες και διαγραφές σε σύγκριση με το MC38-K, μόνο το 35,3% των μη συνώνυμων παραλλαγών και το 5,4% των περιστατικών γονιδίων σύντηξης ήταν κοινά, ενώ η πλοειδία που προσδιορίστηκε ήταν δύο για το MC38-K έναντι πέντε για το MC38-L. Κρίσιμο είναι το γεγονός ότι τα καλά χαρακτηρισμένα νεοεπιτόπια Rpl18 και Adpgk απουσίαζαν από το MC38-K, οπότε τα Τ κύτταρα που δημιουργήθηκαν εναντίον τους αναγνώρισαν και εξόντωσαν το MC38-L, αλλά όχι το MC38-K. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν από μία υποσειρά του MC38 ενδέχεται, επομένως, να μην είναι αναπαραγώγιμα με κύτταρα από διαφορετική πηγή.

Σε γενικότερο πλαίσιο, η ανάλυση προφίλ με SNP array ανέδειξε το πρόβλημα της ανευπλοειδίας και της διασταυρούμενης μόλυνσης μεταξύ των συχνά χρησιμοποιούμενων κυτταρικών σειρών ποντικών· η MC38 ήταν μία από τις 99 σειρές που περιλαμβάνονταν σε αυτό το πάνελ, εκ των οποίων οι 15 παρουσίαζαν σημαντικές αποκλίσεις από το αναφερόμενο γενετικό υπόβαθρό τους [6]. Η μελέτη δεν αναφέρει καμία συγκεκριμένη αποτυχία στην πιστοποίηση της ταυτότητας του MC38, ωστόσο δείχνει ότι η ανάλυση STR από μόνη της ενδέχεται να μην επαρκεί για τη διάκριση υπογραμμών που προέρχονται από το ίδιο ενδογαμικό στέλεχος και δεν αποκαλύπτει καρυοτυπικές μεταβολές. Οι ερευνητές που εργάζονται με το MC38 θα πρέπει να εφαρμόζουν αυστηρές μεθόδους πιστοποίησης της ταυτότητας και να τεκμηριώνουν την ακριβή προέλευση των κυττάρων που χρησιμοποιούνται σε κάθε μελέτη.

Η ορολογία που αφορά την ανοσογονικότητα του MC38 απαιτεί προσοχή. Σε δημοσιεύσεις της δεκαετίας του 1990 και των αρχών της δεκαετίας του 2000, ο MC38 περιγράφεται συνήθως ως όγκος με «χαμηλή» ή «αδύναμη» ανοσογονικότητα, επειδή τα μη τροποποιημένα κύτταρα αναπτύσσονται προοδευτικά σε ανοσοϊκανά ποντίκια C57BL/6 [10] [11] [19]. Η σύγχρονη βιβλιογραφία στον τομέα της ανοσο-ογκολογίας τονίζει, αντίθετα, το υψηλό μεταλλακτικό φορτίο του και την ευαισθησία του στους αναστολείς των σημείων ελέγχου [3]. Και οι δύο περιγραφές είναι ακριβείς στο δικό τους πλαίσιο, και οι αναγνώστες δεν πρέπει να τις θεωρούν αντιφατικές.

Ως χημικά επαγόμενος όγκος ποντικού, ο MC38 δεν αναπαράγει την αλληλουχία της μεταλλάξεως-οδηγού που είναι χαρακτηριστική του ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. Το Cellosaurus δεν περιέχει καμία καταχωρημένη εγγραφή για παραλλαγές αλληλουχίας σχετικά με τη γραμμή αυτή, αλλά η απουσία σχολιασμού δεν αποτελεί απόδειξη ότι δεν υπάρχουν μεταλλάξεις-οδηγοί: οι Schrörs και συνεργάτες, για παράδειγμα, ανίχνευσαν μια μετάλλαξη στο Smad4 στο MC38-L η οποία δεν υπήρχε στο MC38-K [3]. Επειδή οι δύο υπογραμμές διαφέρουν σε τόσο μεγάλο βαθμό, θα πρέπει να αποφεύγονται οι γενικευμένες δηλώσεις σχετικά με «το» μεταλλακτικό τοπίο του MC38, και οι ερευνητές θα πρέπει να επαληθεύουν τον γονότυπο του δικού τους αποθέματος. Τέλος, η καταχώριση για το Cellosaurus συνοδεύεται από μια προειδοποίηση σχετικά με ένα δημοσιευμένο μιτοχονδριακό γονιδίωμα του MCA38: η κατατεθειμένη αλληλουχία (KM820832.1) είναι μια αλληλουχία αρουραίου που φέρει την ένδειξη ότι προέρχεται από το «απομονωμένο στέλεχος 406 αρουραίου», παρά το γεγονός ότι το MC38 είναι ποντικού προέλευσης [7], γεγονός που καταδεικνύει τη σημασία της επαλήθευσης των δημοσιευμένων δεδομένων αλληλουχιών που σχετίζονται με αυτή τη γραμμή.

Δείτε τις πλήρεις προδιαγραφές και κάντε την παραγγελία σας

Εφαρμογές των κυττάρων MC38

Ανοσοθεραπεία του καρκίνου και έρευνα σχετικά με τους ανοσολογικούς σημεία ελέγχου

Το μοντέλο MC38 έχει καταστεί ακρογωνιαίος λίθος της έρευνας για τους αναστολείς των ανοσολογικών σημείων ελέγχου, λόγω του υψηλού μεταλλακτικού φορτίου του και της ευαισθησίας του στον αποκλεισμό των PD-1/PD-L1. Οι Yadav και συνεργάτες χρησιμοποίησαν το MC38 μαζί με ένα δεύτερο ποντικό μοντέλο για να αναπτύξουν και να επικυρώσουν μια διαδικασία φασματομετρίας μάζας–αλληλούχισης εξονίου για την πρόβλεψη ανοσογόνων μεταλλάξεων όγκων. Από τις περισσότερες από 1.300 αλλαγές αμινοξέων που εντοπίστηκαν, περίπου το 13% προβλέφθηκε ότι θα συνδεθεί με το MHC κλάσης I, ένα μικρό ποσοστό των οποίων επιβεβαιώθηκε με φασματομετρία μάζας· η δομική μοντελοποίηση έδειξε ότι οι μεταλλάξεις που εκτίθενται σε διαλύτη ήταν οι ανοσογόνες, ενώ ο εμβολιασμός ποντικών επιβεβαίωσε ότι κάθε προβλεπόμενο πεπτίδιο προκαλούσε θεραπευτικά ενεργές αποκρίσεις Τ-κυττάρων [5]. Αυτή η εμβληματική μελέτη καθιέρωσε το MC38 ως σύστημα αναφοράς για την ανακάλυψη νεοαντιγόνων και συνέβαλε στον καθορισμό αρχών που εφαρμόζονται πλέον στην ανάπτυξη εξατομικευμένων εμβολίων κατά του καρκίνου.

Η έρευνα σχετικά με την ανοσορύθμιση που μεσολαβείται από γλυκάνες έχει επίσης βασιστεί στο MC38. Οι Cornelissen και συνεργάτες χρησιμοποίησαν το CRISPR/Cas9 για να απενεργοποιήσουν το γονίδιο CMAS, το οποίο κωδικοποιεί ένα βασικό ένζυμο της οδού σιαλυλίωσης, και κατάργησαν πλήρως την έκφραση του σιαλικού οξέος στην κυτταρική επιφάνεια [8]. Αντίθετα με τις προσδοκίες, αυτά τα πλήρως αποσιαλιωμένα κύτταρα MC38 αναπτύχθηκαν σημαντικά ταχύτερα in vivo σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου, παρουσίασαν μειωμένη συχνότητα CD8-θετικών Τ-κυττάρων εντός του όγκου και προκάλεσαν απόπτωση CD8-θετικών Τ-κυττάρων με τρόπο ανεξάρτητο από το αντιγόνο. Η χαμηλή έκφραση του CMAS συσχετίστηκε επίσης με μικρότερη επιβίωση χωρίς υποτροπή σε μια κοόρτη ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου. Επομένως, η εργασία αυτή λειτουργεί ως προειδοποίηση για θεραπευτικές στρατηγικές που στοχεύουν στην απομάκρυνση της σιαλυλίωσης του όγκου και τοποθετεί το MC38 ως ένα πολύτιμο σύστημα για την ανάλυση των αλληλεπιδράσεων γλυκανών-ανοσοσυστήματος.

Η απεικόνιση του PD-L1 με νέους ιχνηθέτες PET αποτελεί μια άλλη ενεργή εφαρμογή. Δύο γραμμικοί ραδιοϊχνηθέτες με βάση πεπτίδια, το [^64Cu]/[^68Ga]HKP2201 και το δίμερό του HKP2202, επικυρώθηκαν σε μοντέλα ποντικών που έφεραν αλλογραφτά καρκίνου του παχέος εντέρου MC38 και μελανώματος B16F10, με την έκφραση του PD-L1 να επιβεβαιώνεται μέσω ανοσοφθορισμού και ανοσοϊστοχημείας τόσο στις κυτταρικές σειρές όσο και στους όγκους τους [9]. Μελέτες ανταγωνιστικής πρόσδεσης και αναστολής επιβεβαίωσαν την ειδικότητα ως προς τον στόχο, ενώ η απεικόνιση PET σε συνδυασμό με τη βιοδιανομή ex vivo έδειξε αξιοσημείωτη πρόσληψη στον όγκο με ταχεία κάθαρση από το αίμα και τα κύρια όργανα. Το αλλομόσχευμα MC38 αποτέλεσε έτσι μία από τις πλατφόρμες αναφοράς για την αξιολόγηση της ειδικότητας των ιχνηθετών στη μεταφραστική ανάπτυξη της μη επεμβατικής απεικόνισης των ανοσολογικών σημείων ελέγχου.

Γονιδιακή θεραπεία με κυτοκίνες και τροποποιημένα εξωκυτταρικά κυστίδια

Τα κύτταρα MC38 έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως ως μοντέλο χαμηλής ανοσογονικότητας για τη δοκιμή στρατηγικών γονιδιακής θεραπείας βασισμένων σε κυτοκίνες. Οι Hiroishi και συνεργάτες έδειξαν ότι η μεταγωγή των κυττάρων MC38 με γονίδιο ιντερφερόνης-άλφα (IFN-α) προκάλεσε απόρριψη των τροποποιημένων κυττάρων σε 13 από τα 15 ανοσοϊκανά ποντίκια, και ότι η ανάμειξη κυττάρων που είχαν υποστεί μεταγωγή με IFN-α και CD80 παρήγαγε συνεργιστικά αντικαρκινικά αποτελέσματα, με απόρριψη σε 14 από τα 15 ζώα [10]. Ο Eguchi και οι συνεργάτες του επέκτειναν αυτή την εργασία συγκρίνοντας άμεσα τη γονιδιακή θεραπεία με IFN-α και ιντερλευκίνη-12 (IL-12) στα κύτταρα MC38, διαπιστώνοντας ότι η IFN-α προκάλεσε ειδικές έναντι του όγκου κυτταροτοξικές αποκρίσεις των Τ λεμφοκυττάρων και μακροχρόνια ανοσία, ενώ η IL-12 διέγειρε κυρίως μη ειδική κυτταροκτονία στην οποία συμμετείχαν τόσο CD8-θετικά Τ κύτταρα όσο και φυσικά κυτταροκτόνα κύτταρα [11].

Η Rossowska και οι συνεργάτες της συνέβαλαν καθοριστικά σε αυτόν τον τομέα, τροποποιώντας γενετικά κύτταρα MC38 ώστε να απελευθερώνουν εξωκυτταρικά κυστίδια (EVs) φορτωμένα με ανοσοδιεγερτικό φορτίο [12]. Χρησιμοποιώντας λογοφόρους ιούς, οι συγγραφείς δημιούργησαν υπογραμμές MC38 που υπερεκφράζουν ποντικό IL-12, εκφράζουν shRNA που στοχεύει το TGF-β1, ή και τα δύο, και έδειξαν ότι η γενετική τροποποίηση των γονικών κυττάρων αποτελεί έναν αποτελεσματικό τρόπο για την φόρτωση των μορίων ενδιαφέροντος τόσο σε εξωσώματα που προέρχονται από τον όγκο όσο και σε μικροκυστίδια. Τα τροποποιημένα εξωσώματα ανέστειλαν την ανάπτυξη του όγκου σε ποντίκια που έφεραν υποδόριους όγκους MC38, ενώ τα εξωσώματα από μη τροποποιημένα κύτταρα δεν το έκαναν. Το πιο διαρκές αποτέλεσμα απαιτούσε συνδυασμό με εμβόλια με βάση δενδριτικά κύτταρα, τα οποία αποκατέστησαν την αντικαρκινική ανοσία και προκάλεσαν μια συστηματική απόκριση Th1 [12]. Η μελέτη καθιέρωσε τα τροποποιημένα εξωσώματα που προέρχονται από τον όγκο MC38 ως ανοσοενισχυτικό που μπορεί να υποστηρίξει μια ειδική αντικαρκινική απόκριση και όχι ως αυτόνομο εμβόλιο.

Τα εξωσώματα που προέρχονται από μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα έχουν επίσης μελετηθεί στο πλαίσιο του MC38. Οι Xing και συνεργάτες ανέστειλαν την έκφραση του GARP στα μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα και έδειξαν ότι τα εξωσώματα από αυτά τα κύτταρα (siGARP-MSC) ανέστειλαν τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή του MC38 in vitro, μείωσαν την έκκριση της IL-6 και αδρανοποίησαν εν μέρει την οδό JAK1/STAT3 [13]. Αυτό εντοπίζει έναν παρακρινικό άξονα μεταξύ των στρωματικών και των καρκινικών κυττάρων που θα μπορούσε να αποτελέσει θεραπευτικό στόχο, αν και τα ευρήματα περιορίζονται μέχρι στιγμής στην κυτταρική καλλιέργεια. Συνολικά, αυτές οι μελέτες καταδεικνύουν την ευελιξία του μοντέλου MC38 για την αξιολόγηση ανοσοθεραπευτικών στρατηγικών χωρίς κύτταρα και με βάση τα εξωσώματα.

Ανοσολογία όγκων, προσκόλληση και ανοσολογική διαφυγή

Η αλληλεπίδραση μεταξύ των Τ λεμφοκυττάρων και των καρκινικών κυττάρων MC38 έχει αποτελέσει αντικείμενο λεπτομερούς μηχανιστικής διερεύνησης. Οι MacKenzie, Hoskin και Blay ανέφεραν για πρώτη φορά ότι η προσκόλληση των Τ κυττάρων που ενεργοποιήθηκαν με αντι-CD3 στα κύτταρα MCA-38 μεσολαβούνταν κυρίως μέσω της ιντεγκρίνης VLA-4 (α4β1), και ότι προωθούνταν από τη σηματοδότηση της πρωτεϊνικής τυροσίνης κινάσης και της πρωτεϊνικής κινάσης C, ενώ καταστέλλεται από cAMP-εξαρτώμενες οδούς, με τον ρυθμιστικό μηχανισμό να εντοπίζεται κυρίως στο κύτταρο-εκτελεστή [14]. Μια μεταγενέστερη μελέτη της ίδιας ομάδας διευκρίνισε την εικόνα: τα αντισώματα κατά της α4 ή της β7, ή κατά της VCAM-1 στα καρκινικά κύτταρα, καταστέλλουν την προσκόλληση, ενώ τα αντισώματα κατά της β1 δεν το έκαναν, προσδιορίζοντας τον άξονα α4β7–VCAM-1 ως τον κυρίαρχο. Η εν λόγω εργασία έδειξε επίσης ότι η αδενοσίνη, ένα νουκλεοσίδιο που βρίσκεται σε υψηλά επίπεδα στα υποξικά μικροπεριβάλλοντα των όγκων, καταστέλλει την προσκόλληση των Τ-κυττάρων ειδικά μέσω της αναστολής της λειτουργίας του α4β7 [15]. Οι αναγνώστες θα πρέπει να σημειώσουν ότι οι δύο εργασίες αποδίδουν διαφορετικές β-υπομονάδες στην ίδια αλληλεπίδραση.

Ο ρόλος των φυσικών κυττάρων-δολοφόνων στον έλεγχο της ηπατικής μετάστασης του MC38 έχει εξεταστεί τόσο σε ανοσοϊκανείς όσο και σε ανοσοανεπαρκείς ξενιστές. Οι Cohen και συνεργάτες έκαναν ένεση με κύτταρα MCA-38 (LD-MCA-38) που προέρχονταν από το ήπαρ στην ειλεοκολική φλέβα και διαπίστωσαν ότι τα συμβατικά ποντίκια C57BL/6 συγκράτησαν τα καρκινικά κύτταρα στο ήπαρ και ανέπτυξαν ηπατικές εστίες, ενώ τα αθυμικά γυμνά ποντίκια απομάκρυναν περίπου το 60% των σημασμένων κυττάρων εντός 24 ωρών και δεν ανέπτυξαν ηπατικές αλλοιώσεις [16]. Τα μη παρεγχυματικά ηπατικά κύτταρα από γυμνά ποντίκια ή ποντίκια που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με poly(I:C) — αλλά όχι από συμβατικά ποντίκια που δεν υποβλήθηκαν σε θεραπεία — ήταν κυτταροτοξικά έναντι των LD-MCA-38, και ο υπεύθυνος πληθυσμός ήταν μη προσκολλητικός και θετικός σε ασιαλο-GM1 (AsGM1)· η θεραπεία με αντισώματα κατά του AsGM1 κατάργησε αυτή την προστασία. Οι Volpe και συνεργάτες επέκτειναν αυτά τα ευρήματα, δείχνοντας ότι η εξάντληση είτε με αντι-AsGM1 είτε με αντι--NK1.1 αύξησε σημαντικά τις ηπατικές εστίες και μείωσε την επιβίωση, ενώ η εξάντληση των Τ κυττάρων με αντι-Thy1.2 μείωσε σημαντικά τις εστίες, υποδεικνύοντας ότι τα κύτταρα NK και όχι τα Τ κύτταρα είναι οι κύριοι εκτελεστές που αποτρέπουν την ηπατική μετάσταση του LD-MCA-38 [17]. Ο Johnkoski και οι συνεργάτες του απέδειξαν περαιτέρω ότι μία μεμονωμένη ηπατική εστία του LD-MCA-38, που δημιουργήθηκε με ένεση κάτω από την ηπατική κάψουλα, ενίσχυσε την κυτταροτοξική και πολλαπλασιαστική λειτουργία των μη παρεγχυματικών κυττάρων του ήπατος, αύξησε το ποσοστό των CD8-θετικών και γδ Τ-κυττάρων και ανέβασε τα επίπεδα της ιντερλευκίνης-6 και του παράγοντα νέκρωσης όγκων [18].

Εμβόλια κατά του καρκίνου και ταυτοποίηση αντιγόνων

Τα κύτταρα MC38 έχουν χρησιμεύσει ως αξιόπιστη πλατφόρμα για την ανάπτυξη και τη συγκριτική αξιολόγηση στρατηγικών εμβολίων ολόκληρων καρκινικών κυττάρων. Οι Hodge και Schlom συνέκριναν ρετροϊικούς και ιούς της ευλογιάς (vaccinia) φορείς για τη μεταφορά του συνδιεγερτικού μορίου B7-1 στα κύτταρα MC38 [19]. Και οι δύο φορείς προκάλεσαν ισοδύναμη έκφραση του B7-1 στην επιφάνεια και ίση προστασία έναντι πρόκλησης με φυσικά κύτταρα MC38 14 ημέρες αργότερα. Ωστόσο, κατά την επανέκθεση στις 40 ημέρες, το ρετροϊικό εμβόλιο ήταν λιγότερο αποτελεσματικό, ενώ έναντι των εγκατεστημένων πνευμονικών μεταστάσεων το εμβόλιο με φορέα τον ιό της ευλογιάς ήταν σημαντικά ανώτερο (P = 0,0351· P = 0,024 σε ποντίκια με ανοσία στην ευλογιά· P = 0,0014 κατά τη συνδυασμένη ανάλυση). Η μελέτη κατέληξε στο συμπέρασμα ότι ένα εμβόλιο ολόκληρων καρκινικών κυττάρων με φορέα ιού της ευλογιάς είναι τουλάχιστον εξίσου αποτελεσματικό, και μερικές φορές πιο αποτελεσματικό, από το αντίστοιχο ρετροϊικό εμβόλιο — ένα εύρημα που συνέβαλε στην επακόλουθη κλινική εφαρμογή των εμβολίων κατά του καρκίνου με φορέα ιού της ευλογιάς. Ο Lorenz και οι συνεργάτες του χρησιμοποίησαν κύτταρα MC38 μολυσμένα με έναν ανασυνδυασμένο ιό βακκινίας που κωδικοποιεί το ποντικό LFA-3 (CD48) για να δείξουν ότι η ενισχυμένη έκφραση του LFA-3 ενίσχυε τον πολλαπλασιασμό, την προσκόλληση και την κυτταροτοξικότητα των Τ-κυττάρων in vitro και εμπόδιζε πλήρως την ανάπτυξη του όγκου σε συγγενικά ποντίκια C57BL/6, με μερική προστασία έναντι μεταγενέστερης πρόκλησης με μη μολυσμένα γονικά κύτταρα [20].

Η ταυτοποίηση αντιγόνων όγκου με τη μέθοδο SEREX εφαρμόστηκε στα κύτταρα MC38 από τον Hampton και τους συνεργάτες του, οι οποίοι ανοσοποίησαν ποντίκια C57BL/6 με κύτταρα MC38 και εξέτασαν μια βιβλιοθήκη έκφρασης που προήλθε από τα κύτταρα MC38 με ανοσοορούς [21]. Η προσέγγιση αυτή ταυτοποίησε την ενδογενή πρωτεΐνη περιβλήματος (env) του εκτροπικού ιού της λευχαιμίας και την πρωτεΐνη ATRX του ποντικού ως υποψήφια αντιγόνα όγκου, διευρύνοντας το ρεπερτόριο των γνωστών αντιγόνων που σχετίζονται με όγκους ποντικών και παρέχοντας εργαλεία για μελέτες μηχανιστικών εμβολίων. Ο Takeda και οι συνεργάτες του δημιούργησαν κύτταρα σύντηξης από καρκινικά κύτταρα MC38 και δενδριτικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων δενδριτικών κυττάρων που απομονώθηκαν από ξενιστές που έφεραν όγκο, και έδειξαν ότι ο εμβολιασμός με οποιοδήποτε από τα δύο παρασκευάσματα προκάλεσε εξίσου υψηλή κυτταρολυτική δραστηριότητα των σπληνοκυττάρων κατά του MC38 και κατέστειλε σημαντικά τις εγκατεστημένες πνευμονικές μεταστάσεις του MC38 [22].

Μια ξεχωριστή προσέγγιση γονιδιακής θεραπείας αξιοποίησε την ανοσία έναντι του επιτόπου α(1,3)γαλακτοζυλ (αGal). Ο Unfer και οι συνεργάτες του εξέθεσαν ποντίκια με απενεργοποιημένο το γονίδιο της α(1,3)γαλακτοσυλτρανσφεράσης (αGT) — τα οποία, όπως και οι άνθρωποι, στερούνται του επιτόπου και μπορούν να παράγουν αντισώματα κατά της Gal — σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου MC38 που εκφράζουν αGal [23]. Τα ποντίκια που ανοσοποιήθηκαν με ερυθροκύτταρα κουνελιού ανέπτυξαν τίτλους αντισωμάτων κατά του αGal που πλησίαζαν εκείνους που παρατηρούνται στον ανθρώπινο ορό, κυρίως IgG1 και IgG3, και παρουσίασαν βελτιωμένη επιβίωση και βραδύτερη ανάπτυξη του όγκου σε σύγκριση με τα μη ανοσοποιημένα ποντίκια χωρίς το γονίδιο και τα ποντίκια φυσιολογικού τύπου της ομάδας ελέγχου. Η μελέτη παρέχει in vivo απόδειξη της αποτελεσματικότητας της αGT ως γονιδίου αυτοκαταστροφής στη γονιδιακή θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου· η λύση των κυττάρων στα οποία είχε εισαχθεί το αGal, που προκαλείται από το συμπλήρωμα, είχε αποδειχθεί νωρίτερα in vitro με τη χρήση ανθρώπινου ορού.

Νέες θεραπευτικές στρατηγικές και δοκιμές φαρμάκων

Τα κύτταρα MC38 έχουν χρησιμοποιηθεί για την αξιολόγηση μιας σειράς φαρμακολογικών και φυσικών θεραπευτικών μεθόδων κατά του καρκίνου του παχέος εντέρου. Οι Kuriyama και συνεργάτες έδειξαν ότι η ηλεκτροδιαπερατότητα αύξησε σημαντικά την ευαισθησία των ποντικών καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου, συμπεριλαμβανομένων των MC38, στη βλεομυκίνη in vitro, αν και όχι στη 5-φθοριοουρακίλη ή στη σισπλατίνη [24]. Στα συνοδευτικά πειράματα in vivo, η ηλεκτροχημειοθεραπεία με βλεομυκίνη ή σισπλατίνη προκάλεσε πλήρη υποχώρηση των υποδόριων όγκων του παχέος εντέρου σε πέντε και τέσσερα από τα οκτώ ζώα αντίστοιχα, ένα αποτέλεσμα που αποδίδεται στην αυξημένη συσσώρευση φαρμάκου εντός του όγκου· η δημοσιευμένη αναφορά δεν διευκρινίζει ποια από τις δύο κυτταρικές σειρές χρησιμοποιήθηκε για αυτές τις μεταμοσχεύσεις. Οι Manome και συνεργάτες χρησιμοποίησαν κύτταρα MC38 για να δείξουν ότι η μεταφορά γονιδίων με τη μεσολάβηση υπερήχων μπορούσε να μεταμοσχεύσει γυμνό πλασμιδιακό DNA σε κύτταρα καρκινώματος του παχέος εντέρου τόσο in vitro όσο και σε όγκους MC38 που αναπτύσσονταν σε συγγενικά ποντίκια, αποδεικνύοντας τη σκοπιμότητα της μηχανικής ηχοποίησης ως μη ιογενούς τεχνικής μεταφοράς γονιδίων [25].

Οι προφάρμακα δικλοφενάκης υποκατεστημένα με καρβοράνιο έχουν επαναξιολογηθεί χρησιμοποιώντας το μοντέλο MC38. Μεταξύ μιας επανασχεδιασμένης σειράς, μια αμιδίνη ζwitterιονική που φέρει ένα σύμπλεγμα νίντο εξάλειψε τη βιωσιμότητα των MC38 σε χαμηλές συγκεντρώσεις της τάξης των μικρομοριακών, δρώντας κυρίως μέσω ισχυρής αναστολής της κυτταρικής διαίρεσης και μέτριας απόπτωσης που συνοδεύεται από εξάντληση των αντιδραστικών ειδών οξυγόνου και αζώτου, ενώ η ίδια η δικλοφενάκη και οι οξινδόλες υποκατεστημένες με καρβοράνιο δεν ήταν κυτταροτοξικές [26]. Οι οπτογενετικές προσεγγίσεις έχουν επίσης χρησιμοποιήσει κύτταρα MC38: Τα κύτταρα MC38 και B16F10 που εκφράζουν την φωτοελεγχόμενη αντλία πρωτονίων προς τα έξω αρχαιοροδοψίνη-3 (AR3) υπέστησαν αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο μετά από ακτινοβολία με πράσινο φως, και οι όγκοι που εκφράζουν AR3 και μεταμοσχεύθηκαν σε ποντίκια C57BL/6 παρουσίασαν σημαντική συρρίκνωση ή καταστολή της ανάπτυξης μετά την ακτινοβολία [27]. Ο Park και οι συνεργάτες του χρησιμοποίησαν κύτταρα MC38 ως μάρτυρες καρκινώματος του παχέος εντέρου σε μια μελέτη γονιδιακής θεραπείας που στοχεύει στο μελάνωμα, αξιοποιώντας κατασκευάσματα προαγωγού/ενισχυτή ειδικά για τα μελανοκύτταρα, συνδεδεμένα με το γονίδιο της φωσφορυλάσης νουκλεοσιδίου πουρίνης του Escherichia coli· το 96% των κυττάρων MC38 παρέμεινε βιώσιμο μετά τη θεραπεία με προφάρμακο, επιβεβαιώνοντας την έκφραση που περιορίζεται στον ιστό [28].

Συμπέρασμα

Τα κύτταρα MC38 κατέχουν κεντρική θέση στην έρευνα για τον καρκίνο του παχέος εντέρου και την ανοσο-ογκολογία. Η συγγενική τους συμβατότητα με ποντίκια C57BL/6, το υψηλό μεταλλακτικό φορτίο, το πλούσιο τοπίο νεοαντιγόνων και η ευαισθησία τους στους αναστολείς των ανοσολογικών σημείων ελέγχου τα καθιστούν συνολικά ένα από τα πιο ενημερωτικά προκλινικά μοντέλα για τη μελέτη των νεοπλασμάτων του παχέος εντέρου, τις αποκρίσεις των CD8-θετικών Τ-λεμφοκυττάρων, τα μακροφάγα που σχετίζονται με τον όγκο, τα εμβόλια κατά του καρκίνου και τη βιολογία της οδού του υποδοχέα προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου 1. Δεκαετίες δημοσιευμένων εργασιών έχουν επικυρώσει την εγκυρότητα του μοντέλου στους τομείς της γονιδιακής θεραπείας, της βιολογίας της προσκόλλησης, των ηπατικών μεταστάσεων και της αξιολόγησης νέων φαρμάκων, ενώ πιο πρόσφατες μελέτες που αξιοποιούν εξωκυτταρικά κυστίδια, απεικόνιση PET και οπτογενετική συνεχίζουν να διευρύνουν τη μεταφραστική του σημασία. Δεδομένης της τεκμηριωμένης απόκλισης μεταξύ των υποσειρών, η προέλευση πρέπει να καταγράφεται και ο γονότυπος να επαληθεύεται για κάθε μελέτη. Οι ερευνητές που χρειάζονται ένα αξιόπιστο, καλά χαρακτηρισμένο μοντέλο καρκίνου του παχέος εντέρου ποντικού μπορούν να παραγγείλουν ή να ζητήσουν πληροφορίες σχετικά με τα κύτταρα MC38 απευθείας στο cytion.com.

Σημαντικές δημοσιεύσεις

1. Corbett TH, Griswold DP Jr, Roberts BJ, et al. (1975) Σχέσεις επαγωγής όγκων στην ανάπτυξη μεταμοσχεύσιμων καρκίνων του παχέος εντέρου σε ποντίκια για δοκιμές χημειοθεραπείας, με μια σημείωση σχετικά με τη δομή των καρκινογόνων ουσιών. Cancer Research 35:2434–2439. PMID: 1149045
2. Tan MH, Holyoke ED, Goldrosen MH (1976) Αδενοκαρκινώματα του παχέος εντέρου ποντικών: μέθοδοι επιλεκτικής καλλιέργειας in vitro. Journal of the National Cancer Institute 56:871–873. PMID: 1255804 · DOI: 10.1093/jnci/56.4.871
3. Schrörs B, Hos BJ, Yildiz IG, et al. (2023) Οι σειρές καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου MC38 από δύο διαφορετικές πηγές παρουσιάζουν σημαντικές διαφορές στο μεταγραφόμενο, στο μεταλλαξιόμενο και στην έκφραση νεοαντιγόνων. Frontiers in Immunology 14:1102282. PMID: 36969213 · DOI: 10.3389/fimmu.2023.1102282
4. Morimoto-Tomita M, Ohashi Y, Matsubara A, et al. (2005) Κύτταρα καρκινώματος του παχέος εντέρου ποντικού που δημιουργήθηκαν για υψηλή συχνότητα εμφάνισης πειραματικών ηπατικών μεταστάσεων εμφανίζουν επιταχυνόμενη και ανεξάρτητη από πρόσφυση ανάπτυξη. Clinical & Experimental Metastasis 22:513–521. PMID: 16320114 · DOI: 10.1007/s10585-005-3585-0
5. Yadav M, Jhunjhunwala S, Phung QT, et al. (2014) Πρόβλεψη ανοσογόνων μεταλλάξεων όγκων μέσω του συνδυασμού φασματομετρίας μάζας και αλληλούχισης εξονίου. Nature 515:572–576. PMID: 25428506 · DOI: 10.1038/nature14001
6. Didion JP, Buus RJ, Naghashfar Z, et al. (2014) Η ανάλυση προφίλ με συστοιχία SNP σε κυτταρικές σειρές ποντικών προσδιορίζει τα στελέχη προέλευσής τους και αποκαλύπτει διασταυρούμενη μόλυνση και εκτεταμένη ανευπλοειδία. BMC Genomics 15:847. PMID: 25277546 · DOI: 10.1186/1471-2164-15-847
7. Zhang CF, Yu XJ, Wang BY, et al. (2016) Ακολουθία ολόκληρου του μιτοχονδριακού γονιδιώματος μιας κυτταρικής σειράς MCA38 από καρκίνο του παχέος εντέρου αρουραίου. Mitochondrial DNA Part A 27:2034–2035. PMID: 25434994 · DOI: 10.3109/19401736.2014.974176 — βλ. τη σημείωση προειδοποίησης στην καταχώριση CVCL_B288 του Cellosaurus.
8. Cornelissen LAM, Blanas A, van der Horst JC, et al. (2019) Η διαταραχή του μεταβολισμού του σιαλικού οξέος οδηγεί στην ανάπτυξη του όγκου μέσω της αύξησης της απόπτωσης των CD8+ Τ κυττάρων. International Journal of Cancer 144:2290–2302. PMID: 30578646 · DOI: 10.1002/ijc.32084
9. Zhang L, Zhang S, Wu J, et al. (2023) Ιχνηθέτες PET με βάση γραμμικά πεπτίδια για την απεικόνιση του PD-L1 σε όγκους. Molecular Pharmaceutics 20:4256–4267. PMID: 37368947 · DOI: 10.1021/acs.molpharmaceut.3c00382
10. Hiroishi K, Tüting T, Tahara H, Lotze MT (1999) Η γονιδιακή θεραπεία με ιντερφερόνη-άλφα σε συνδυασμό με τη μεταγωγή CD80 μειώνει την ογκογένεση και την ανάπτυξη καθιερωμένων όγκων σε μοντέλα όγκων με χαμηλή ανοσογονικότητα. Gene Therapy 6:1988–1994. PMID: 10637450 · DOI: 10.1038/sj.gt.3301034
11. Eguchi J, Hiroishi K, Ishii S, Mitamura K (2003) Γονιδιακή θεραπεία του καρκίνου με ιντερφερόνη-άλφα και ιντερλευκίνη-12: η ιντερφερόνη-άλφα προκαλεί ανοσοαποκρίσεις ειδικές για τον όγκο, ενώ η ιντερλευκίνη-12 διεγείρει τη μη ειδική καταστροφή των καρκινικών κυττάρων. Cancer Immunology, Immunotherapy 52:378–386. PMID: 12739068 · DOI: 10.1007/s00262-002-0367-2
12. Rossowska J, Anger N, Wegierek K, κ.ά. (2019) Αντικαρκινικό δυναμικό των εξωκυτταρικών κυστιδίων που απελευθερώνονται από γενετικά τροποποιημένα κύτταρα καρκινώματος του παχέος εντέρου ποντικού με υπερέκφραση της ιντερλευκίνης-12 και shRNA για το TGF-β1. Frontiers in Immunology 10:211. PMID: 30814999 · DOI: 10.3389/fimmu.2019.00211
13. Xing H, Liang C, Xu X, et al. (2020) Τα μεσεγχυματικά στρωματικά/βλαστοειδή κύτταρα με καταστολή του GARP αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων του παχέος εντέρου ποντικού (MC38) μέσω εξωσωμάτων. Journal of Cellular and Molecular Medicine 24:13984–13990. PMID: 33155413 · DOI: 10.1111/jcmm.16008
14. MacKenzie WM, Hoskin DW, Blay J (1999) Η προσκόλληση των ενεργοποιημένων με αντι-CD3 Τ κυττάρων ποντικού σε συγγενικά κύτταρα αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου ρυθμίζεται διαφοροποιημένα από οδούς εξαρτώμενες από πρωτεϊνική τυροσίνη κινάση, πρωτεϊνική κινάση C και cAMP στο κύτταρο-εκτελεστή. Biochemical and Biophysical Research Communications 255:460–465. PMID: 10049731 · DOI: 10.1006/bbrc.1999.0232
15. MacKenzie WM, Hoskin DW, Blay J (2002) Η αδενοσίνη αναστέλλει την προσκόλληση των Τ λεμφοκυττάρων στα κύτταρα αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου που μεσολαβείται από την ιντεγκρίνη άλφα(4)βήτα(7). Experimental Cell Research 276:90–100. PMID: 11978011 · DOI: 10.1006/excr.2002.5514
16. Cohen SA, Tzung SP, Doerr RJ, Goldrosen MH (1990) Ο ρόλος των ηπατικών κυττάρων θετικών στην ασιαλο-GM1, τα οποία προέρχονται από αθυμικά γυμνά ποντίκια ή ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με πολυινοσινικό-πολυκυτιδιλικό οξύ, στην καταστολή των πειραματικών ηπατικών μεταστάσεων που προέρχονται από το παχύ έντερο. Cancer Research 50:1834–1840. PMID: 2306736
17. Volpe CM, Mehta N, Kim U, et al. (1999) Τα κύτταρα NK θετικά στο AsGM1 αποτρέπουν τη μετάσταση εισβαλλόντων καρκινικών κυττάρων LD-MCA-38 σε γυμνά ποντίκια. The Journal of Surgical Research 84:157–161. PMID: 10357913 · DOI: 10.1006/jsre.1999.5631
18. Johnkoski JA, Tzung SP, Doerr RJ, Cohen SA (1992) Η ηπατική μετάσταση μεταβάλλει την ανοσολογική λειτουργία των μη παρεγχυματικών κυττάρων του ήπατος ποντικών. Archives of Surgery 127:1325–1329. PMID: 1444795 · DOI: 10.1001/archsurg.1992.01420110073015
19. Hodge JW, Schlom J (1999) Συγκριτικές μελέτες ενός φορέα ρετροϊού έναντι ενός φορέα ποξϊού σε εμβόλια ολόκληρων καρκινικών κυττάρων. Cancer Research 59:5106–5111. PMID: 10537283
20. Lorenz MG, Kantor JA, Schlom J, Hodge JW (1999) Πρόκληση αντικαρκινικής ανοσίας από καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν ένα ποντικό ανάλογο του LFA-3 μέσω ενός ανασυνδυασμένου ιού της ευλογιάς. Human Gene Therapy 10:623–631. PMID: 10094205 · DOI: 10.1089/10430349950018698
21. Hampton TA, Conry RM, Khazaeli MB, κ.ά. (2000) Ανάλυση SEREX για την ταυτοποίηση καρκινικών αντιγόνων σε μοντέλο αδενοκαρκινώματος ποντικού. Cancer Gene Therapy 7:446–455. PMID: 10766351 · DOI: 10.1038/sj.cgt.7700124
22. Takeda A, Homma S, Okamoto T, et al. (2003) Οι συγχωνεύσεις ανώριμων δενδριτικών κυττάρων με καρκινικά κύτταρα προκαλούν ισχυρή αντικαρκινική ανοσία. European Journal of Clinical Investigation 33:897–904. PMID: 14511362 · DOI: 10.1046/j.1365-2362.2003.01194.x
23. Unfer RC, Hellrung D, Link CJ Jr (2003) Η ανοσία στο επιτόπιο άλφα(1,3)γαλακτοσύλιο παρέχει προστασία σε ποντίκια που εκτέθηκαν σε καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου τα οποία εκφράζουν άλφα(1,3)γαλακτοσυλ-τρανσφεράση: ένα νέο γονίδιο αυτοκαταστροφής για τη γονιδιακή θεραπεία του καρκίνου. Cancer Research 63:987–993. PMID: 12615713
24. Kuriyama S, Matsumoto M, Mitoro A, et al. (2000) Ηλεκτροχημειοθεραπεία για τον καρκίνο του παχέος εντέρου με κοινά χρησιμοποιούμενα χημειοθεραπευτικά φάρμακα σε μοντέλο ποντικιών. Digestive Diseases and Sciences 45:1568–1577. PMID: 11007108 · DOI: 10.1023/a:1005565027969
25. Manome Y, Nakamura M, Ohno T, Furuhata H (2000) Τα υπερηχητικά κύματα διευκολύνουν τη μεταφορά γυμνού πλασμιδιακού DNA σε κύτταρα καρκινώματος του παχέος εντέρου in vitro και in vivo. Human Gene Therapy 11:1521–1528. PMID: 10945766 · DOI: 10.1089/10430340050083252
26. Selg C, Gordić V, Krajnović T, et al. (2024) Επανασχεδιασμός και αξιολόγηση προφαρμάκων με βάση τη δικλοφενάκη, υποκατεστημένων με καρβοράνιο, και το αντικαρκινικό τους δυναμικό. Scientific Reports 14:30488. PMID: 39681576 · DOI: 10.1038/s41598-024-81414-x
27. Nakao S, Kojima K, Sato K, et al. (2025) Οπτογενετική θεραπεία του καρκίνου με χρήση της φωτοενεργοποιούμενης αντλίας πρωτονίων προς τα έξω, της ροδοψίνης archaerhodopsin-3 (AR3). Journal of the American Chemical Society 147:44131–44140. PMID: 41186408 · DOI: 10.1021/jacs.5c13053
28. Park BJ, Brown CK, Hu Y, et al. (1999) Η ενίσχυση της έκφρασης γονιδίων ειδικών για το μελάνωμα με τη χρήση ενός ενισχυτή ειδικού για τα μελανοκύτταρα σε σειρά οδηγεί σε αυξημένη κυτταροτοξικότητα του γονιδίου της φωσφορυλάσης νουκλεοζιδίου πουρίνης στο μελάνωμα. Human Gene Therapy 10:889–898. PMID: 10223723 · DOI: 10.1089/10430349950018292

Βιβλιογραφικά δεδομένα και περιλήψεις που αντλήθηκαν από το PubMed. Μεταδεδομένα κυτταρικής σειράς από την καταχώριση του MC-38 στο Cellosaurus (RRID:CVCL_B288).